• Santé - TAP, Anticorps, IP

[Biologie Moléculaire] différence(s) TAP-tag / IP ?

Ainsi, on peut envisager une purif TAP pas forcement lorsqu'on n'a pas d'anticorps pour une IP, mais aussi lorsqu'on a aucune idée a priori du complexe.  [...] La méthode TAP est désormais utilisée en routine et souvent couplée à des analyses en spectro de masse avec une efficacité qui a fait ses preuves.  [...]

[Biochimie] Etude des partenaires protéiques : Co-Immunoprécipitation, Tap-Tag et double hybride

Et je me posais la question de savoir quel type d'anticorps fallait-il utiliser pour la Co-Ip Un anticorps poly ou monoclonal Si j'utilise un anticorps polyclonal, il risque de se fixer un peu partout sur ma protéine et je risque d'empêcher les interactions.  [...] tap-tag. c'est de l'in vivo aussi, y a pas le problème des anticorps comme l'IP, et c'est bien pur grâce à l'utilisation de deux colonnes justement, mais après c'est fait avec une protéine de fusion donc ça peut aussi changer l'interaction.  [...]

Levures et TAP tag à grande échelle

Dans un article (Gavin et al. (2002) Nature 415.141-7), ils disent qu'ils ont branché l'étiquette TAP à l'extrémité C-terminale des ORF de gènes de levures.  [...] La technique du TAP-tag permet bien de purifier des complexes entiers. On utilise une protéine fusionnée au tag comme appat, et au bout de deux purifications (colonne d'IgG et colonne de calmoduline), on considère que les protéines co-purifiées interagissent de manière assez spécifique avec la protéine d'intérêt pour qu'elles forment réellement un complexe.  [...]

PCR sur colonie après insertion chromosomique... ?

Cependant, ce que je ne comprends pas, c'est que j'ai à la base étalé après électroporation mes bactéries sur un milieu contenant la kanamycine. Théoriquement, les bactéries qui y poussent devraient donc avoir intégré par recombinaison homologue TAP + Kan dans leur génome non.  [...] Tu n'es jamais sur de ce qu'il y a dans tes boites, il y a de nombreuses bactéries possédant des résistances antibiotiques, pour peu que tu ais manipulé du mieux possible mais qu'une bactérie qui ne vienne pas de ton étalement se soit retrouvé dans ta boite de pétri, tu as peut être une bactérie résistate a la kanamycine et qui ne vienne pas de ce que tu as transformé, qui se soit retrouvé en culture.   [...]

Purification protéine taggée avec HIS6

Dans ton cas, je ne vois pas ce que le tap-tag t'apporterai. Je crois que le choix du His-tag est plutot bon (a quand la recombinaison homologue en routine chez les eucaryotes superieurs..).  [...] Les IP marchent bien mais tu as besoin de cross-linker ton anticorps sous peine de masquer ou fortement contaminer ton signal. Et pour la quantite de materiel, ca depend de la technique de mass spec que tu utilises. MALDI plus sensible mais gere mal les melanges d'ou le passage en gel 2D conseiller, ou electrospray (ESI) ou la la quantite de materiel requise pour l'analyse est plus importante mais les melanges sont analysables et du coup la 2D n'est pas necessaire.  [...]

Les récepteurs couplés aux protéines G | Dossier

A une approche initiale de criblage par double hybride dans la levure en collaboration avec la société Hybrigenics (Paris) sont venues s'ajouter deux approches protéomiques complémentaires. la purification des complexes protéiques associés aux MTR exprimés en lignée cellulaire par Tandem Affinity Purification (TAP) et la purification de protéines de lysats de cerveaux de souris interagissant avec la queue C-terminale des MTR par chromatographie d'affinité.  [...] Grâce à l'utilisation d' anticorps développés par notre équipe et par l'équipe des Drs. F. Fraschini et D. Angeloni, nous avons caractérisé l'expression des MTR par immunohistochimie dans la rétine et diverses structures du cerveau.  [...]

[Biologie Moléculaire] Quel est le rôle du protéasome ?

Pour la production d'antigene, le proteasome est toujours dans le coin, pas tres loin du RE et des proteines TAP qui servent justement a amener les peptides antigeniques vers les molecules du CMH-1. Mais j'avoue que je ne me rappelle pas si il y a une association directe entre le proteasome et le complexe TAP.  [...] Il faut aussi savoir que le proteasome possede des sous-unites inductibles (3 je crois) qui, lorsqu'elles sont presentent, modifient les activites peptidasiques et specialisent le proteasome dans la production de peptides antigeniques (on l'appelle d'ailleurs l'immunoproteasome.).   [...]

[Biologie Moléculaire] Ligation

Lors de la ligation, on a dû préparer 5 tubes pTetC, pM1, pM2, et 2 tubes témoins. Ils contiennent tous le vecteur digéré. Ce que je n'arrive pas à résoudre, c'est pourquoi il y a deux témoins et l'information qu'ils apportent, sachant que T1 ne contient pas de ligase, et T2 en contient.   [...] En général, on déphosphoryle le plasmide après la digestion et on fait un contrôle de ligation avec ligase et sans insert (mais vous n'avez pas déphosphorylé pendant ton TP si ). Comme ça ça te montre combien tu as de plasmides qui se recircularisent (et donc mal déphosphorylés) et tu en as beaucoup moins sur boîte qu'en T2.   [...]

[Biotechnologie] Global Analysis of Protein Activities using proteome chips

Merci. Oui j'ai du mal à comprendre le but précis de cette publi. Que font ils exactement Je ne comprend pas trop pourquoi le pdf a été supprimé étant donné que l'article est téléchargeable par tous sur google. il suffit de taper le titre.   [...] Ce sont les noms des protéines. Sur le côté gauche, tu as le nom des protéines interagissant avec les lipides, en haut à gauche, le type de lipide, au milieu la quantification de l'interaction (la séparation fort ou faible vient de se paramètre), à droite la localisation de la protéine dans la membrane cellulaire, si c'est une kinase ou si sa fonctio est inconnu.   [...]

[Biologie Cellulaire] Les pompes Cellulaires

- on peut citer le transporteur TAP (Transporter associated with Antigen Processing) impliqué dans l'importation des antigènes dans le RE pour permettre sa présentation à la surface des cellules infectées.  [...] De rien. Tu as aussi les pompes SERCA qui permettent de faire rentrer les ions calciums dans le réticulum sarcoplasmique contre leur gradient de concentration.   [...]