• Santé - Tampon, Migration, Page

[Biochimie] DTT et WesternBlot

WesternBlot on ne peut pas plus classique. dénaturation des protéines 10min à 95°C dans du tampon de Laemli (contenant donc du SDS...). Bien sûr SDS-PAGE pour la migration... Donc en conditions dénaturantes.  [...] Le résultat peut être le maintien de la présence de la bande à 300 kDa ou pas. Si elle est toujours présente, cela veut dire soit que la formation de son trimère n'est pas dépendante d'un maintien de la structure 3D de l'interface de trimérisation par des ponts disulfures, soit que la bande à 300 kDa est une protéine ou un complexe qui n'a rien à voir avec sa protéine d'intérêt (bande non spécifique).   [...]

[Biochimie] Tampon de charge

Il parait que j'ai un problème de migration de mes protéines (SDS-PAGE). Est ce que je dois arrêter forcément l'électrophorèse quand la ligne bleu (du tampon de charge) atteint le front bas des plaques de verre.  [...] ps. le générateur de courant que j'utilise est ancien type BIO-RAD 500/200 power supply. Et je ne suis pas sur que l'aiguille indique le voltage désiré.   [...]

[Biologie Moléculaire] shifting sur sds-page anticorps

J'ai un petit problême avec des gels SDS-Page ( criterion precast gel, stainfree, 26 puits) migration dans tampon de migration et slb4X utilisé comme loading buffer.  [...] Je dis peut être une bêtise, mais ca me parait super haut comme poids moléculaire apparent pour des igG. Tu fais ta migration dans des conditions particulières.  [...]

[Biochimie] glycine

Dans le gel de resolving, la vitesse de migration des ions glycinates augmente dans le gel de séparation, car le pH du gel de séparation est de 8.8, donc les protéines sont moins rapides que les ions porteurs. Les protéines se font dépasser par les ions glycinates et les différents complexes protéines-SDS se séparent grâce aux pores du gel.  [...] Si le papier SDS-PAGE est tant cite c'est surtout parce que le tampon de depot des proteines dans un gel (quel qu'il soit) est le tampon laemmli. Les articles citent en fait la composition du tampon, plus que la methode de SDS-PAGE.  [...]

[Biochimie] Aggrégation des échantillons de SDS-PAGE

J'ai ensuite réalisé des SDS-PAGE mais lorsque j'ajoute le tampon de Laemmli et le ²-mercapto, des aggrégats se forment et donc, après application du courant, cela bloque la migration.  [...] Je ne suis pas habitué personnellement à travailler sur ce type d'échantillon alors pourrais-tu nous en dire plus stp. Tu récoltes des coraux ou des coquillages dans la mer c'est ça Et après tu en fais quoi Tu les broies dans un tampon spécial Pourrais-tu décrire les différentes étapes que tu utilises avant le dépôt sur gel ou le dosage par BCA (centri, tampon...) Merci. ^^.  [...]

Sds-page

Et pour ce qui est d'utiliser du SDS à la fois dans les gels et dans le tampon de migration, pensez vous que cela interviens dans la concentration finale du SDS et donc de son rôle pourquoi ne pas en mettre que dans le tampon.  [...] Oui je sais, on peut aussi utiliser du DTT qui est non hépatotoxique et inodore pour les dénaturer. Mais je me demande pourquoi on utilise du SDS dans le tampon ET dans les gels. Ne pourions nous pas mettre du SDS en plus forte concentration dans le tampon et attribuer la charge du gel de concentration et du gel de migration simplement avec des solutions de Lower buffer et Upper buffer sans SDS (Trizma base + Acide chlorhydrique pour ajuster le pH souhaité).  [...]

QCM - Immunoprécipitation

C-Après migration en SDS-PAGE et transfert sur nitrocellulose, on identifie la protéine B dans les complexes retenus par l'anticorps anti-protéine A au poids moléculaire de 5kDa.  [...] En fait, pour moi D est faux car la migration en SDS-PAGE est dénaturante et qu'on aura donc plus de complexes multimoléculaires.  [...]

Migration SDS PAGE

Le problème viens de la migration (200Volt constant, ampérage se régule seul), qui est réalisée en tampon MES (50mM mES, 50mM Tris Base, 0.1% SDS et 1mM EDTA), la migration du gel se passe bien, la séparation du poids de marqueur moléculaire est jolie et bien distincte, mais après coloration au bleu de coomassie (1H sous agitation), et décoloration à l'eau tiède.  [...] Je suis ce protocole depuis toujours pour la migration des gels en tampon MOPS (protéine standard), et je n'ai aucun soucis. Le fait de passer en tampon MES (protéine de faible poids) me donne des gels illisibles.  [...]

[Biologie Moléculaire] Electrophorèse (ADN sur Agarose) et Bromure d'éthidium

Si vous avez perdu du signal en laissant trop migrer votre ADN et que vous n'avez pas mis de BEt dans le tampon de migration, vous pouvez également récupérer ce gel et le mettre dans un bain de tampon de migration + BEt + agitation. Il faut incuber pendant un bon moment quand même, donc s'il vous reste de l'échantillon ça peut être plus rapide de refaire un gel et d'en redéposer (en laissant moins migrer cette fois ou en mettant du BEt dans le tampon cette fois ).  [...] Si tu n'arrives pas à bien voir tes bandes dans le bas du gel (ou même dans tout le gel si tu n'as pas mis assez de BEt voire si tu l'as oublié ), tu peux le mettre dans une cuve avec du tampon de migration et du BEt. Mets le tout sous agitation pour que le BEt diffuse plus facilement.  [...]

[Biochimie] Chromatographie d'exclusion

Conseil. le gel c'est des petit billes, elle coulent mais au moindre mouvement de l'eau elles bougerons. Donc pour éviter ça au maximum pendant la migration (après le dépos) met 3 ou 4 cm de tampon en réserve au dessus du gel. Comme ça quand tu en rajoutera ça brassera moins le gel que si le niveau de tampon est a raz (tu me suis).  [...] Pour résumer tu ouvre le robinet pour faire descendre le niveau du tampon a raz le gel quand tu va faire ton dépôt et quand tu fait ta migration.  [...]