• Santé - Tampon, Migration, Cuve

[Biologie Moléculaire] Bleu de charge

Je me posais une question concernant les DNase et le tampon de charge. Celui ci n'est pas autoclaver ou autre, est ce que le bleu de bromophenol inhibe les DNase qu'il pourrait y avoir dans le tampon ou ailleurs.  [...] D'autant plus que pour être dans un environnement complétement DNase free, faudrait penser à tout stériliser (bloc pour couler l'agarose, cuve à electrophorèse, tampon de migration, etc...).  [...]

[Biochimie] Migration Western Blot

Peut-être que tu charges trop de protéines Le fait que le profil de migration du marqueur moléculaire soit OK indique que le pb vient de tes échantillons -. vérifier donc le tampon de charge (il semblait marcher avant) et ton matériel initial...tu resuspends combien de culot de bactérie Essaie avec moins.  [...] As tu essayé de faire un nouveau tampon de chargement le tampon de chargement joue une rôle important dans la migration. Peut être que les petites protéines sont présentes en très faibles quantité ce qui fait qu'on ne les voit pas sur la fin de gel (explication au bol, je précise).  [...]

[Biologie Moléculaire] Concentration dosage ARN

Si je lave ma cuve d'électrophorèse avec du SDS 10%, et que je rince à l'eau DEPC... que j'utilise que des erlens/éprouvette stérile, que je fait mon tampon de migration avec de l'eau DEPC. Croyez-vous que cela sera suffisant pour éviter les dégradations.  [...] Ca me parait juste énorme d'avoir de telles concentrations grâce à un kit commercial. J'avais des rendements dans ces eaux là mais par la bonne vieille méthode de l'extraction au phénol, mes rendements par kit étaient beaucoup moins importants.   [...]

[Biologie Moléculaire] western blot flou

C'est bizzare. Quand je fais un petit gel à 10 %, il migre à 100 V 2 H maxi. Le problème vient peut-être du tampon trop faible en ions (vérifie les concentrations ainsi que les réactifs stocks) et peut-être aussi de ta cuve. Si les bandes sont floues c'est plus un problème de migration que de transfert je pense.  [...] de toute manière dés lundi j'ai prévu de refaire toutes les solutions on ne sait jamais. ce sont des solutions stocks préparéés à chaque fois par un membre du labo donc on ne sait jamais surtout qu'on vient de me signaler un doute sur le tampon de migration préparé par 2 personnes différentes (donc y a déjà un doute).  [...]

[Biologie Moléculaire] Résolution gel d'agarose

voila j'ai essayé le tampon 1X mais ça a pas plu à ma cuve d'électrophorèse. elle s'est arreté en cours de migration (100v). si je mets du 0.5X ça va.  [...] - faire attention à la concentration de BET (je ne sais comment tu visualises ton gel, si tu mets de BET dans le gel ou dans une solution après la migration), ça peut relativement masquer/demasquer des petites tailles.  [...]

[Biologie Moléculaire] Electrophorèse (ADN sur Agarose) et Bromure d'éthidium

Si vous avez perdu du signal en laissant trop migrer votre ADN et que vous n'avez pas mis de BEt dans le tampon de migration, vous pouvez également récupérer ce gel et le mettre dans un bain de tampon de migration + BEt + agitation. Il faut incuber pendant un bon moment quand même, donc s'il vous reste de l'échantillon ça peut être plus rapide de refaire un gel et d'en redéposer (en laissant moins migrer cette fois ou en mettant du BEt dans le tampon cette fois ).  [...] Si tu n'arrives pas à bien voir tes bandes dans le bas du gel (ou même dans tout le gel si tu n'as pas mis assez de BEt voire si tu l'as oublié ), tu peux le mettre dans une cuve avec du tampon de migration et du BEt. Mets le tout sous agitation pour que le BEt diffuse plus facilement.  [...]

[Biochimie] Migration Western Blot - Page 2

J'avoue que lors des migration je ne regarde pas vraiment l'ampérage mais ma collègue à le même système de cuve et on partage les générateurs et elle n'a pas ces soucis.  [...] en tension constante ton intensité varie aussi vu que la résistance n'est pas constante. La migration doit aller de moins en moins vite, non.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de migration électrophorèse (produits bloqués dans les puits)

Est-ce que la cuve de ton electrophorèse est propre Quand elles sont pas lavées depuis un moment ça peut créer des problèmes de migration.  [...] J'ai testé plusieurs choses après vos conseils (lavage de la cuve entre autre). J'ai changé de ladder et je n'ai plus le problème rencontré pour la migration du ladder.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème Western Blot

Lors de ma migration, le front de migration fait comme une vague au milieu du gel, problème de polymerisation Tampon pas assez mélangé.  [...] Après migration (celle-ci droite)et révélation avec un rouge ponceau, j'observe que mes bandes à faible poids moléculaire font des vagues ou smiley pas contents. Bref c'est moche.  [...]

une seul bande d'ARN visible voir deux...

Le smear peut aussi provenir d'un probleme de gel et/ou de migration. A l'exception du smear qui se situe entre les deux bandes d'ARNr qui lui correspond aux ARNm. de quel espece extrais tu tes ARN.  [...] - En ce qui concerne la cuve je l'ai lavé avec du SDS avant comme indiqué par QIAGEN.En ce qui concerne le tampon c'est celui indiqué sur le protocole QIAGEN.  [...]