• Santé - Tampon, Lavage, Concentré

[Immunologie] Composition tampon de lavage ELISA

Je suis à la recherche de la composition d'un tampon de lavage concentré 50x.  [...] J'ai essayé à partir de tampon 10x d'augmenter les doses de sels mais la solution sature et surtout à 4°C tous les sels précipitent. J'ai vu des solutions de lavage concentrées 50x assez visqueuse qui ne cristallise pas.  [...]

[Biologie Moléculaire] l'extraction d'ADN

Tampon de lyse. contient ce qui va lyser la cellule. Il contient souvent des protéases (clivent les protéines des parois) et des détergents (dissolvent les membranes). Cela permet de libérer tout le contenu cellulaire.  [...] Tampon de lavage. Souvent composé d'éthanol concentré, il permet de nettoyer l'ADN de ses composants sans le solubiliser.  [...]

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Pour être sûr que les différentes isoenzymes soient présentes, un western blot est pratiqué avec l'extrait cellulaire pur (1), le pic correspondant au premier lavage de la colonne (2), celui supposé contenir la protéine kinase C (3) et un dernier avec un lavage fait avec le tampon additionné de chlorure de sodium à la concentration de 2 M (4) (fig.  [...] Les molécules CED-32, CED-33 et CED-39 ne donnent aucune variation significative de la liaison de l'ester de phorbol pour l'enzyme, en effet, avec une concentration de 1.10 -5 M cette liaison s'effectue avec plus de 80% pour les trois composés. Au contraire, le CED-28 est capable d'inhiber le couplage enzyme-ligand quasi totalement (.  [...]

[Biotechnologie] [sels] dans un tampon

Bonjour tout le monde, je possede dans une manip un tampon de lavage pour une chromato d'affinité sur du cobalt, et je saisis pas la forte concentration en sels (1000mM).  [...] Le TCEP est un agent reducteur tout comme le DTT, suivant le pH de tes tampons l'un est preferable a l'autre. Mais les deux sont la pour eviter l'oxidation de tes proteines (notamment des cysteines).  [...]

[Biochimie] Protocole IMAC

En général, on rajoute de l'imidazole à une concentration finale de 20 mM (pour une colonne de nickel, 10 mM max si c'est une colonne de cobalt) dans le lysat (avant le dépôt sur la colonne) et dans le tampon de lavage pour diminuer la fixation de contaminants sur la colonne.  [...] Mais si c'est la première fois que tu fais cette purif, je te conseille de ne pas en mettre et de faire un gradient lors de ton élution (on utilise généralement un tampon contenant 200-250 mM d'imidazole quand on ne fait pas de gradient). Voilà les grandes lignes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de gel d'agarose

Je suis d'accord avec Mantos, soit tu as une concentration en sels trop importante, soit c'est que tu as dans ton tampon d'élution de ta colone des traces plus ou moins importantes de ta solution de lavage de la colone. Ca se produit notamment quand apres les lavages tu ne prends pas soint d'éliminer toute trace de liquide entre le tube collecteur et la colone.  [...] Personnellement ce genre de bandes me fait plus penser à des problèmes de concentration ou alors a des impuretés dans le gel. Tu as essayé avec une autre poudre d'agarose pour voir si ça faisait pareil.  [...]

utilisation du tween 20

Je voulais savoir à quoi servait le Tween 20 qu'on utilise dans la solution contenant l'Ac lorsqu'on fait une immunodétection.   [...] Le tween est un détergent. Dans un tampon d'ELISA ou de western blot, il est très dilué afin d'éliminer les interactions non spécifiques. Certains ne l'utilisent que dans les tampons de lavage, certains dans tous les tampons avec globalement le même résultat final.  [...]

[Biochimie] Fixer des protéines dans un gel

Par contre, dès que j'essaie de les fixer (avec du TCA, par exemple), là, je perds carrément les petites protéines (diffusion dans le tampon de fixation + dans les lavages, probablement), et les grosses sont également plus faibles.  [...] Je vais du coups tenter un peu un mix de ce que vous me proposez, avec une déshydratation/fixation du gel au méthanol suivit d'une pulvérisation du tampon de fixation (formaldéhyde avec éthanol), puis lavage (ou pas, je vais tester)... Je vous tiens au courant, mais ce n'est pas pour tout de suite (une autre expérience en parallèle...).  [...]

[Biologie Cellulaire] Mesure de l'activité d'exocytose de la HRP chez l'amibe (Niveau L2)

Ton protocole est tout à fait juste. Peut-être une petite étape de lavage à 4°C avant de les suspendres dans ton tampon d'exocytose afin d'éliminer des HRP qui serait associées de manière non spécifique aux cellules. (Et à 4°C pour bloquer l'exocytose afin de ne pas démarrer l'exocytose avant le lavage).  [...] J'ai pensé au dosage du calcium parce que l'exocytose est parfois associé à la variation de la concentration du calcium au niveau synaptique par exemple mais c'est peut être un raccourci et une fausse route dans le cas de l'amibe.  [...]

[Biologie Moléculaire] Probleme purification sur gel d'agarose

Oui j'ai recentrifuger apres le PE et j'ai attendu 1min avant de centrifuger pour l'elution. Le tampon d'elution est celui du kit, j'imagine que c'est du TE a pH8,5.  [...] tu as l'air de tout faire correctement... mon conseil serait d'ouvrir un kit nuef et de preparer toi meme le PE. et de prendre de nouvelles colones, il m'est arrivé des trucs bizarres avec certaines. Quand tu rajoutes ton tampon d'élution, il s'absorbe correctement sur la membrane.  [...]