• Santé - Tampon, Extraction, Classique

Isolat de protéines

Je ne pense pas que l'extraction de protéines varie tant que ça d'un matériau biologique à l'autre. Donc il suffit juste de faire un broyat de pois/soja. Tu broit dans un tampon avec si possible un inhibiteur de protéase. Tu récupère le surnageant, et puis ensuite l'extraction de protéines classique, avec un détergent doux de type Tween (80, 20).  [...] Tu broit dans un tampon avec si possible un inhibiteur de protéase. Tu récupère le surnageant, et puis ensuite l'extraction de protéines classique, avec un détergent doux de type Tween (80, 20). Tu précipites ensuite les protéines à l'éthanol à 95% mais le problème est que sa dénature.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR temps réel

De base, on va plutot envoyer à séquencer un transcrit PCR classique (du tube pcr ou apres visulatisation sur gel et extraction de la bande) cependant rien n'empêche de prendre le produit qPCR, il suffit de le purifier en enlevant le tampon et la polymérase (bien que je ne sois pas sur que ca interfère vraiment, mais dans le doute).  [...] une purification à l'acétate de sodium/ethanol devrait faire l'affaire ensuite tu resuspends dans le volume approprié en eau distillé ou en tampon TE au choix.  [...]

[Biochimie] Sollution tampon votre avis

Le tanpon que tu souhaites utiliser est un tampon d'extraction donc pour moi le plus important c'est qu'il te permettes d'extraite ta protéine avec un rendement maximal et tout en gardant l'activité de ta protréine. La composition que tu as donné me parait classique.  [...] Ensuite concernant ta seconde question. Difficile a répondre sans connaitre ton protocole expérimental (composition tampon, volume tp vs volume extrait enzymatique,...). Peux tu me donner quelques élements de réponses si ce n'ai pas trop confidentiel Mais sache qu'il existe des méthodes pour changer de tampon après ton extraction pour conditionner ta protéine dans un autre tampon... (Dialyse, unité de concentration,...).  [...]

[Biochimie] Extraction d'une protéine nucléaire pour WB

J'ai d'abord commencer à faire une extraction au SDS (plus cocktail d'inihibiteur), j'ai aussi essayé tampon d'extraction classique (Triton, Glycerol, NaCl, EDTA, anti protéases). Apres dosage et dilution dans lameli, j'ai fait un WB (migration sur gel 10% SDS.  [...] Le probleme c'est que ma protéine est pas très exprimé et les anticorps ne sont pas de très bonne qualité (et les tampons d'extraction pas forcement les meilleurs), au final j'ai beaucoup de non spécifique, pas beaucoup de signal au niveau de ma bande.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot sur des echantillons de foie murins

En gros pour faire c que tu veux faire, il faut un tampon classique d'extraction (Tris, Nacl, Triton, quelques inhibiteurs de phosphatase et de protéases). La difficulté est due a la taille de la FAS (230kDa je crois) donc il faudra faire un gel peu concentré (genre 8%) pour celle la et un plus concentré pour IR (10 ou 12%).  [...] un stock entre 2 et 10 est confortable. Tu peux diluer avec le même tampon qui a servi a l'extraction. D'ailleurs pour déposer en western, vu qu'il faut le même volume partout, il faut prélever une quantité d'échantillon et compléter tout le monde au meme volume avec ce tampon, c'est donc plus pratique d'en faire plus et de le conserver.  [...]

Extraction protéique dans du laemmli.

Je veux faire des extraits de plantules d'arabidopsis, et j'avais fait comme avec mon tampon d'extraction classique, cad, broyage dans le laemmli au piston (dans la glace, je me doute que c'est pas très bon pour le SDS qui est dans le laemmli), suivi d'une centri à 4°C et avant dépôt sur gel, 95°C 5min.  [...] Sinon je sais qu'il existe un tampon d'extraction tout près chez BIORAD qui permet de faire cette extraction puis de déposer directement sur gel.  [...]

[Identification] IPG strip gel combiner a une extraction au PBS

Je me suis renseigner dans le labo et apparement les problemes rencontres proviendrait d'un extrait proteique contaminer par des solutions utiliser pendant l'extraction classique au PBS.  [...] L'extraction classique utilise un tampon phosphate pour le broyage initial, je doute que cela soit ca du fait des lavages, ensuite les proteines sont precipites avec du TCA, laver avec de l'ethanol et remis en solution avec un tampon dont je n'ai pas la composition sous le coude (je suis en stage donc je ne connais pas encore toute les solutions exactement).  [...]

[Biologie Moléculaire] Electrophorèse en gel d'agarose pGFP

J'ai réalisé sur un plasmide pGFP une extraction classique puis un traitement à la Rnase et parallèlement une digestion avec BamHI.  [...] Pour la piste après le marqueur de taille, c'est l'extraction avec kit, (+Rnase) je m'attendais à avoir plusieurs fragments d'une intensité supérieure à la méthode classique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème génotypage souris mutées

Je soupçonne ma méthode d'extraction car l'échantillon avec lequel j'ai retrouvé la 2ème bande n'a pas été extrait de la même façon que ceux que j'ai analysé ensuite (robot Qiagen vs tampon maison + PK), même si ça n'explique pas pourquoi j'avais perdu cette bande pour cet échantillon (dégradation ).  [...] En plus c'est un protocole d'extraction très rapide (15 min avant PCR) et qui comprend aussi un mix tout près optimisé pour la PCR (tampon de dépot compris), enfin c'est pas pour leur faire de la pub mais si ça peut aider quelqu'un d'autre.  [...]

[Biologie Moléculaire] Tampon de lyse extraction ADNg

Je sais qu'on peut utiliser un tampon de lyse avec du SDS et de la protéinase K, mais je n'ai aucune idée des proportions, ni du temps d'incubation, ni de la température à utiliser… Quelqu'un pourrait-il m'éclairer.  [...] J'ai cherché sur ce forum, et Yoyo disait qu'il avait un protocole d'extraction ( http.//forums.futura-sciences.com/se...archid=4618296 ). Si tu lis ce message Yoyo, et que ton protocole parle d'un tampon de lyse, pourrais-tu me l'envoyer par MP Je t'en serai très reconnaissant.  [...]