• Santé - Tampon, Extraction, Chargement

Western Blot

C'est un peu désespérée que je viens vers vous aujourd'hui. Nous avons effectué un Western Blot en TP la semaine passée, les protocoles nous ont été distribués le matin même, je n'en avais jamais fais auparavant, c'est une technique qui prend un certains temps et donc tout a été fait à l'arrache, nous n'avons pratiquement pas eu d'explication.   [...] - quelle est la différence entre un tampon d'extraction et un tampon de chargement.  [...]

[Biologie Moléculaire] Taq DNA polymerase et Go taq DNA polymerase

La particularité de ce tampon est d'être un tampon de réaction ET un tampon de chargement (tu charges directement sur gel après la PCR).  [...] Je ne connaissait pas mais en effet, le green Gotaq buffer contient, en plus des éléments nécessaires à la Taq polymérase (hormis les primers et dNTP), un tampon de chargement qui permet un dépôt direct sur gel.  [...]

[Biochimie] Migration Western Blot

Tu as bien un changement de couleur du tampon de chargement après les 5 min a 95 degrés et tu centrifuges bien tes échantillons après les avoir fait bouillir.  [...] As tu essayé de faire un nouveau tampon de chargement le tampon de chargement joue une rôle important dans la migration. Peut être que les petites protéines sont présentes en très faibles quantité ce qui fait qu'on ne les voit pas sur la fin de gel (explication au bol, je précise).  [...]

[Génétique] Extraction, purification et analyse d'ARN (Nanodrop et bioanalyser)

Oui, la RNAsin est un inhibiteur des RNases. Mon avis personnel la dessus. si tu as des RNases il y ades chances pour qu'elles proviennent de l'extraction, c'est pour ca que j'ai arreté d'ajouter des RNases dans la RT. Quand on voit le prix de ce machin... (et mes RT fonctionnent aussi bien...).  [...] Il n'y a pas besoin de charger de l'ADN. Le tris est un tampon tres souvent utilisé. Je ne sais pas a quel moment tu l'utilises, mais ca peut servir a.  [...]

[Biochimie] B-Galactosidase d'origine vegetale

1- Pour l'extraction, j'ai fait bcp de recherche puis j'ai constate que le tampon d'extraction le plus utilise est le NaOAc avec du mercaptoethanol. Comment savoir le %, la concentration de mon tampon.  [...] 1- Comment je peux s'avoire les tempons utilisé pour les différent étape. tompon de la réaction enzymatique, tompon d'extraction et tempon de chargement et de lavage pour chromatographie DEAE.  [...]

[Biochimie] Nickel et congélation ...

C'est clair qu'il serait facile de le séparer par gel filtration, mais le problème c'est que tu ne peux pas charger un grand volume sur la colonne et ça dilue généralement ta protéine... Et surtout mon chef est pas très motivé pour... Si j'avais la possibilité je testerais plein de trucs lol.  [...] chargement de ton surnageant sur la colonne de Ni 2+ (équilibrée avant avec le même tampon que précédemment. d'ailleurs tu peux aussi ajouter de l'imidazole à 20 ou 30 mM pour augmenter la spécificité de fixation sur la colonne).  [...]

HPLC en proteomique

J'ai une solution contenant environ 70 mg de protéine, base sur une estimation que j'ai effectuée après visualisation sur SDS-PGE. La protéine est diluée dans un tampon Tris à pH 8.0 et son pI est de 6.1. J'ai à ma disposition une colonne Hitrap Q HP de 1 ml et un collecteur de fraction.  [...] Je purifie donc ma protéine sur une colonne en utilisant du Tris à pH 8.0 comme tampon de chargement. Après avoir déposé mes fractions sur gel SDS-PAGE, je peux voir la protéine au bon poids moléculaire dans les fractions 10-12, ce qui correspond à 400-500mM de NaCl.  [...]

[Biologie végétale] Moteur circulation sève élaborée

A l'endroit du chargement du phloème, il y a augmentation de la concentration en sucre, il y a donc un apport d'eau (probablement du xylème), d'où la pression hydrostatique importante.  [...] Notons que ce mécanisme n'a pas besoin strictement de l'évapotranspiration. le chargement actif du phloème en matière lourde (rendant l'eau plus dense) suffit peut-être à faire circuler l'eau par gravité. C'est alors juste comme un téléphérique transportant plus de passagers à la descente qu'à la montée.  [...]

[Biochimie] Expérience sur les processus d'apparition de la vie. - Page 2

Il est donc envisageable que le système ait fonctionné sans les enzymes de chargement. Maintenant je ne suis pas à fond sur ces questions. Cependant, même en étant à distance de cette thématique, on peut constater qu'il existe une très intense recherche sur ces enzymes. Ce n'est sans doute pas pour rien.  [...] Je me suis posé la question, et la réponse semble non. Si j'ai bien compris, on peut (disons souvent, ce n'est pas général) charger différents acides aminés sur un même type d'ARNt. La spécificité du chargement est pour la plus grande partie due à la protéine.  [...]

[Biochimie] Améliorer la quantité, qualité et pureté d'une extraction d'ARN

J'ai effectué une extraction d'ARN à partir des cellules THP-1 humaines par deux techniques différentes. la technique d'extraction par précipitation en utilisant le trizol et la technique par extraction par colonne utilisant le kit direct-zol ARN miniprep et des colonnes appel zymo-Spin IIC.  [...] Le début de l'extraction est très important. conditions d'homogénéisation (mécanique, chimique), il faut se mettre à froid, ainsi que la quantité de matériel (trop est pire que pas assez.). Comment avez vous procédé.  [...]