• Santé - Tampon, Extraction, ADN

[Biochimie] Tampon TE

A la fin d'un extraction d'ADN, je me suis trompée, jai utilisé du tampon TE 10X au lieu du tampon 1X.. et mes mesures au spectrophotometre me montrent que jai tres peu voir pas du tout d'ADN.. pensez vous que ce soit dû à l'utilisation de tampon TE10X Est ce que je peux y remedier parce que le probleme cest que je nai plus les echantillons à l'origine de l'extraction.  [...] La force ionique est un parametre essentiel pour le decrochage de l'ADN des colones, donc oui avec un TE10X tu as toute les chances que l'ADN soit encore dans la colone.  [...]

Tampon TE

A la fin d'un extraction d'ADN, je me suis trompée, jai utilisée du tampon TE 10X au lieu du tampon 1X.. et mes mesures au spectrophotometre me montre que jai tres peu voir pas du tout d'ADN.. pensez vous que ce soit dû à l'utilisation de tampon TE10X Est ce que je peux y remedier parce que le probleme cest que je nai plus les echantillons à l'origine de l'extraction.  [...] il y a une section biologie dans le forum, ta demande y serait mieux placée.   [...]

Rôle des composants du Edward Buffer (tampon d'extraction d'ADN)

Rôle des composants du Edward Buffer (tampon d'extraction d'ADN).  [...] - EDTA. inhibiteur des métallo-enzymes comme les nucléases qui dégradent l'ADN. Il séquestre les ions magnésium Mg2+ et bloque ainsi l'activité de nombreuses nucléases qui sont dépendantes de cet ion.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ADN

Je dois trouver le rôle de chacun des composants d'un tampon de lyse précédant l'extraction d'ADN (extraction phénol - chlorophorme) à partir de cellules animales. Quelqu'un pourrait-il me confirmer ou infirmer les rôles supposés.  [...] Tris pH8 - ajustement du pH à 8,0 qui permet d'éviter de se retrouver avec un pH acide qui favorise la dégradation de l'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Conservation de l'adn

J'ai extrait de l'ADN génomique bactérien, mais je me pose la question de la durée que je peux le conserver (c'est pour faire des PCR ensuite).  [...] Selon vous, combien de temps ces ADN peuvent être conservés dans un bon état, à -20°C, à 4°C Sachant que les ADN bruts sont dans le tampon d'élution du kit d'extraction, et les ADN dilués dans de l'eau DNase-RNase Free.  [...]

[Divers] Intérêts du NaDOC, SS DNA, chelex, Tris Cl dans plusieurs expériences

Je réalise des ChIP (chromatin immunoprecipitation), et après extraction de l'ADN sur lequel les protéines ont été crosslinkées au formaldehyde, l'ADN est dans un tampon dit d'immunoprécipitation. celui-ci contient du NaDOC... à quoi cela sert-il.  [...] Je ne connais pas suffisement les protocoles que vous utilisez, cependant l'utilisation de Tris Cl sert milieu tampon. Il permet de conserver un ph régulier durant toutes vos expériences. Ainsi, travaillant avec de l'adn et des protéines, tous deux très semsibles aux changements de ph, vous évitez des dénaturations.  [...]

Na-bisulfite (NAHSO3) , rôle ???

Je ne l'ai jamais utilise dans le cas d'extraction d'ADN, mais dans le cas de purification/extraction de proteines. Il agirait comme anti-oxydant.  [...] J'ignore le rôle du bisulfite de sodium dans le cadre d'un tampon d'extraction. Je voulais juste signaler qu'il pouvait aussi être utilisé pour une mutagenèse. d'où l'intérêt de remplacer C par U pour introduire des mutations ponctulelles.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR après tri cellulaire au FACS

je souhaite réaliser un génotypage cellules spécifiques. Je vais donc marquer et trier des cellules au FACS, puis je réaliserai une PCR sur les cellules récupérées. Je voulais savoir dans quel tampon il était préférable de reprendre mes cellules pour réaliser la PCR à la suite.  [...] Le même tampon que celui du tri, puis tu centrifuge tes cellules et tu fais un culot sec si tu veux les stocker à -80 ou alors tu fais directement la lyse puis l'extraction d'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Tampon d'extraction d'ADN

ces jours ci nous sommes entrain de faire un TP sur la préparation de solutions Tampon pour extraction d'ADN, le probléme c'est que on nous a donnés un exercice que j'avoue j'ai pas compris bon. on nous a donnés.  [...] Tu peux facilement remonter à la quantité de matière ajoutée en chaque soluté. MgCl2, NaCl etc. grâce au volume et à la concentration.   [...]

[Biologie Moléculaire] probléme de migration d'ADN sur gel d'agarose

De l'ADN a été extrait à partir de pulpe de tomate et ensuite stocké au congélateur.Je pars donc ensuite de cette extraction (2microlitres) que j'ajoute à 48 microlitres d'une solution contenant de l'eau, un tampon, des bases nucléotidiques, les primers REVERSES et FORWARD ainsi que la TAQ polymérase.Ensuite on lance la PCR pour 40 cycles.  [...] Peut etre que tu n'a tout simplement rien amplifié et que c'est l'ADN génomique n'est pas sorti du puit... Essaye d'autres primers sur ta solution d'ADN pour voir si autre chose peu etre amplifié et ainsi migrer correctement dans ton gel.  [...]