• Santé - Tampon, Enzyme, Extraction

[Biochimie] Extraction enzymes

Un tampon est généralement mieux car il permet de limiter les variations de pH qui pourraient dénaturer l'enzyme au cours de l'extraction. D'autre part, il peut y avoir dans les tampons des inhibiteurs de protéases ou autres agents assurant la stabilité de l'enzyme car une extraction met la protéine recherchée en présence de composés nocifs pour la protéine.  [...] Cependant, si ton enzyme est robuste, il n'est pas étonnant qu'une extraction à l'eau t'es permis de mesurer tout de même une activité.  [...]

[Biologie Moléculaire] traitement à la DNase inefficace...

dans mes manips d'extraction et purification d'ARNm, j'ai un problème de contamination d'ADN génomique dans ma solution purifiée.  [...] Extraction avec le kit de purification Picopure Arcturus, avec un extraction buffer, puis sur colonne Picopure. Ils proposent de faire un traitement de DNAse Qiagen directement sur la colonne (10µl de DNase + 30 µl de tampon RDD (tampon de l'enzyme).  [...]

[Biochimie] Role de la BSA dans une extraction protéique ??

Le protocole que je dois utiliser pour extraire une enzyme de la chair d'un fruit implique l'ajout de BSA dans le tampon d'extraction.  [...] Sauf que le BSA doit avoir précipité aussi et la reprise du culot va modifier la concentration en BSA parasite de mon extrait par rapport à la gamme étalon si je la fait dans mon tampon d'extraction (avec PVPP et BSA).  [...]

Extraction enzymes

j'ai fait une extraction des enzymes à l'aide de tampon Tris-maléate contenant Triton X100,mais je ne sais pas à quelle température je peux conserver mes extraits.  [...] Je te suggère de les conserver à -20°C. Généralement on conserve les enzymes très concentrées en solution, à -20°C.  [...]

Rôle des composants du Edward Buffer (tampon d'extraction d'ADN)

Je voudrais connaître le rôle précis des composants du tampon d'extraction que j'utilise, the Edward Buffer, pour extraire l'ADN de pétunia.  [...] - EDTA. inhibiteur des métallo-enzymes comme les nucléases qui dégradent l'ADN. Il séquestre les ions magnésium Mg2+ et bloque ainsi l'activité de nombreuses nucléases qui sont dépendantes de cet ion.  [...]

[Biochimie] Dosage des protéines totales méthode de Bradford.

idéalement il faut utiliser le même tampon, en effet, puisque certains composés de certains tampons ont une absorbance propre. Après, ça dépend des conditions de mesure, par exemple moi qui mets 1 µL d'échantillon dans 1mL de réactif, je ne me pose pas la question.  [...] je ne parle pas d'ici de la dilution de l'échantillon,mais je parle de la dissolution de SBA.Est-elle dans de l'eau distillée ou dans le tampon d'extraction.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème génotypage souris mutées

J'ai testé differents protocoles d'extraction, mais aucun ne contient du phénol, un tampon maison. Tris 10mM pH8.4, KCl 50mM, MgCl2 1.5mM, Tween 45% et un tampon commercialisé par Viagen. Le Direct PCR, je n'en connais pas la composition mais il doit être équivalent.  [...] Je soupçonne ma méthode d'extraction car l'échantillon avec lequel j'ai retrouvé la 2ème bande n'a pas été extrait de la même façon que ceux que j'ai analysé ensuite (robot Qiagen vs tampon maison + PK), même si ça n'explique pas pourquoi j'avais perdu cette bande pour cet échantillon (dégradation ).  [...]

[Biochimie] SDS page

aprés extraction des protéines. je n'arrive ppas à obtenir des bandes sur mon gel polyacrilamides. même si je précipite mes protéines avec l'acétone. il faut noter qu'il y à smire (trajectoir) sur mon gel. est ce que quelqu'un peut m'aider.  [...] le tampon phosphate permet l'extraction des protéine totales d'une poudre vegetale, au moin tu sera sure de l'existance de votres protéines, en plus c'est un protocol trés simple.  [...]

[Biologie végétale] Plante C4 et C3

Je travaille sur les plantes en C3 et C4 (ce qui est vaste) mais n'ayant eu de cours la dessus je fais appel à vous pour savoir si quelqu'un pourrait m'éclaircir à ce sujet ( voir des cours pour que je me renseigne de manière autonome).   [...] D'autre part, j'ai effectuer des mesure de l'activité enzymatique sur une extraction protéique de maïs et une autre espèce en C3 (Dichanthelium). J'ai mesuré la DO du NADH sous 5 conditions de tampon NAD-MDH/NADP-MDH, NAD-ME/NADP-ME, PEPc/PEPcK, NAD-GAPDH/NADP-GAPDH, Ala-AT/Asp-AT.  [...]

[Biologie Moléculaire] Tampon de lyse extraction ADNg

Je sais qu'on peut utiliser un tampon de lyse avec du SDS et de la protéinase K, mais je n'ai aucune idée des proportions, ni du temps d'incubation, ni de la température à utiliser… Quelqu'un pourrait-il m'éclairer.  [...] J'ai cherché sur ce forum, et Yoyo disait qu'il avait un protocole d'extraction ( http.//forums.futura-sciences.com/se...archid=4618296 ). Si tu lis ce message Yoyo, et que ton protocole parle d'un tampon de lyse, pourrais-tu me l'envoyer par MP Je t'en serai très reconnaissant.  [...]