• Santé - Tampon, Digestion, Enzyme

[Biologie Moléculaire] Utilisation de Klenow

il faut inactiver l'enzyme préalablement, sinon elle va continuer a couper. Pas besoin de purifier le plasmide, tu peux le faire ensuite. Il faut quand même que la klenow puisse fonctionner dans le tampon utilisé pour la digestion.  [...] Par habitude, desactive toujours ton enzyme avant de faire autre chose car en changeant de tampon tu peux modifier la spécificité de son activité.  [...]

Problème lors de ligation

J'ai un plasmide pcDNA3 contenant un insert qui est situé entre deux sites de restrictions Xho I, je digère ce plasmide avec l'enzyme Xho I puis je fais migrer dans un gel TAE 1% avant de récupérer mon insert et mon plasmide ouvert ( grâce à un kit wizard).  [...] Je précise que j'ai vérifié qu'il n'y avais pas de conta dans la BSA ou le tampon on l'enzyme en réalisant un digestion sur un autre vecteur ou cela fonctionne.  [...]

[Biologie Moléculaire] Protocole digestion

Je vais donc faire une digestion en 2 lots. l'un avec NcoI, l'autre avec BamHI. Après le gel, j'inverse les lots et les digère avec l'autre enzyme. Enfin, clonage. je vais commencer par cloner le bout Cter contenant le site BamHI, puis je clonerai le Nter entouré par les deux extrémités NcoI.  [...] derniere chose, n'oublie pas qu'il ne faut pas depasser 10% de ton volume total en enzyme de restriction. Sinon le glycerol qu'elles contiennent fini par totalement perturbé ta digestion (inhibition, activité star etc...).  [...]

[Biologie Moléculaire] Ligation

Pour les conditions de digestion, j'ai travaillé avec des enzymes Fermentas je suis aller sur leur site, ils proposent de faire une double digestion dans du tampon BamHI avec 2fois plus d'enzyme NotI que BamHI. J'ai digéré 5µg pendant un peu plus de 2h00.  [...] En ce qui concerne la réponse de Tanguy, je rajoute la CIP dans ma digestion avec les enzymes de restriction donc théoriquement je n'ai pas de problème de déphosphorylation du plasmide.  [...]

[Biochimie] enzyme de digestion-restriction

q'elle est la difference entre l'enzyme de digestion ( utilisé avant la technique PFGE) et l'enzyme de restriction.  [...] nb. dans mon travail l'enzyme de digestion est I-CeuI,  [...]

besoin d'aide lactase

j'aurais une autre question. pourquoi le lactose, si il n'est pas digéré par l'enzyme, rend-il malade Les personnes intolérantes au lactose ont souvent des maux de ventre prononcés quand elles boivent du lait. Le lactose ne pourrait-il pas traverser le système digestif et se faire oublier.  [...] est ce que cela signifie que les intolérant ne posséde pas cette enzyme qui permet la digestion du lactose si oui j'ai alors tout compris et je vous remercie pour tout.  [...]

[Divers] hydrolyse de l'amidon par l'amylase

je suis en 1ére S.en fait en Tp on a vu que l'amylase hydrolise l'amidon (l'amidon est un glucide c'est ça ) pour former du glucose mais ce que j'aurais voulu savoir pour l'ecrire en 2 lignes en petite conclusion-ouverture,c'est ce que cette enzyme permet dans notre corps.  [...] ..moi je penserais que pour notre digestion cette enzyme de la salive est importante puisqu'elle permet de...euh..de faciliter la digestion ou peut être le broyage des aliments...la salive prépare les aliments à la digestion... en tout cas c'est pas assez précis ce que je dis là.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ADN génomique

Et pour l'utilisation du SAU3A, c'est parceque je veux faire une digestion partielle pour faire une banque et parcequ'elle est compatible avec BamH1. Et pur le tampon c'est le tampon B2 qui est normalement spécifique du SAU3A.  [...] Or dans votre grand mix vous diminuez encore votre ratio d'enzyme. Du coup il faut soit digérer beaucoup plus longtemps soit augmenter la durée de digestion. Je vous conseille de jouer sur les deux paramètres.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ADN plasmidique

Sinon pour les bactéries classiquement utilisées en labo de bio mol (E. coli principalement), de nombreux kits d'extraction de plasmides existent sous les noms mini- (environ 100 mL de culture bactérienne), midi- (250 mL de culture), maxi- (500 mL) ou mega-prep (1L et plus) et sont fournis par des compagnies comme Qiagen.   [...] Digestion enzymatique de la paroi et/ou lyse mécanique des cellules (par exemple avec des micro billes en ver dans un tube que tu vortex en présence des cellules bactériennes). Il faut procéder à cette lyse dans un tampon de lyse contenant notamment de l'EDTA pour protéger le matériel génétique des DNAses et éventuellement des dénaturant protéiques tel que le SDS et le béta-mercaptoéthanol.  [...]

[Génétique] hybridation adn/adn : technique de southern blot

Ensuite, j'ai effectué une électrophorèse en gel d'agarose à 1%. la migration à duré 1heure environ, à 120volts. Le problème qui se pose est qu'à l'issue de la migration, les fragments des différents puits ont très peu migrés, puisqu'à peine 3 ou 4 bandes sont visibles en haut du gel.   [...] [quote]- digestion incomplète, ou absence d'enzyme, mais dans ce cas, je me dis qu'on observerait de gros patés en haut du gel. [quote].  [...]