• Santé - Tampon, Charge, ADN

[Biologie Moléculaire] Amplification infructueuse

J'ai entendu dire que le plus souvent quand il y a probleme d'amplification (du a la quantité d'ADN, ce qui est juste un hypothese ici) c'était plus souvent du a une surcharge qu'a une sous charge, s'l y a trop de materiel les amorces n'arrivent plus a s'hybrider, de plus dans le protocol ils pronostiquent 1-20 microlitres, (soit 0.  [...] 25-5microlitres pour 25 de V total) donc si c'est supposé amplifier dès 0.25 microlitres 1 microlitres devrait être large, mais oui je peux tenter. Par contre contre tu disais utiliser 100ng dans 50 microlitres (ce qui reviens a 50 dans 25 de V total, peut etre qu'au final c'est bien une surcharge, bien que de 50 a 80 ca ne soit pas énormément plus non plus), je peux essayer de charger plus ou moins par acquis de consciences, mais ce sera vraiment par acquis de conscience car je pense que si ca venait de la charge j'aurais quelque chose, (de moche, surement, mais quelque chose quand meme, non).  [...]

[Biologie Moléculaire] Révélation des extraits d'ADN

Mais vous avez mis du bleu de charge dans vos ADN non Les bandes bleues c'est en vision directe ou après une quelconque révélation que vous n'expliquez pas.  [...] 3-parallèlement, j'ai préparer les échantillons à spoter en prélevant 7µl d'extraits d'ADN dissouts dans du TE, auxquels je rajoute 3µl de tampon de charge (Bleu de bromophénol).  [...]

[Biologie Moléculaire] BET ou Bromure d'Ethidium...quelles aternatives ?

C'est un tampon de charge 6X qui se stocke à 4°C. Du coup on reprends les échantillons d'ADN avec ce tampon, et on ne met rien dans le gel. On fait d'une pierre deux coups.  [...] Dans le laboratoire ou j'ai effectué l'un de mes stages cette année, mon encadrant m'a montré la révélation sur gel avec le BET. Il prépare son gel d'agarose ave tampon TAE, et pour le refroidir il lui met de l'eau froide. Ensuite, quand il a considéré que c'était ''moins chaud'' il décida de mettre les quelques gouttes de BET dans le récipient.  [...]

[Biologie Moléculaire] le gel idéal??

Pour faire la digestion a la RNase, tu prends 9ul d'ADN, tu mix avec 1ul de RNaseA et tu incubes 30 min a 37 deg. ensuite tu mix tes 10ul avec le tampon de charge et tu fais migrer sur ton gel.. Normalement les pattates devraient disparaitres.  [...] ... Donc ton ADN migre mais très lentement. Dans ce cas soit on passe à un pourcentage en agarose plus faible, soit on augmente le temps de migration. On peut augmenter le voltage mais sur de longues durées ça chauffe trop, ça peut causer des changements de migration.  [...]

[Biologie Moléculaire] échec de révélation sur gel d'agarose des produits d'ADN après purification

normalement, avant d'éluer (EB ou H2O) la colonne est centrifugée pour faire passer le tampon de lavage puis recentrifugée a vide. Normalement plus un poil d'ethanol.  [...] Normalement on lave avec un tampon qui doit contenir de l'éthanol mais l'ADN reste encore sur la silice de la colonne. On centrifuge pour éliminer l'éthanol et on recentrifuge la silice à vide pour finir de sécher (l'éthanol peut sinon faire des interférences lors du traitement de l'ADN pour le dosage ou la migration) On dépose ensuite de l'eau stérile ou alors un tampon d'élution sur la silice de la colonne(perso je préfère l'eau).  [...]

RT-PCR et PAGE en conditions dénaturantes???

L'urée je ne sais pas. Quand on fait l'électrophorèse dans du TBE, on utilise du TBE pour faire le gel. Quand c'est dans du TAE, on utilise du TAE pour le gel. Le but de l'opération est d'avoir un maximum de sel dans le tampon pour que le courant passe bien et que l'ADN (chargé négativement) soit attiré vers le pôle positif.  [...] C'est sutout vrai pour la migration d'ADN circulaire, type ADN bactérien, mitochondrial ou encore plasmide. On obtient souvent 2 bandes correspondants à une forme enroulées qui va se faufiller dans le gel, et une bande de plus haut PM apparent. Je ne me rapelle pas avoir utiliser de l'urée pour un northern ou un southern blot.  [...]

[Biologie Moléculaire] Bandes d'électrophorèse disparaissant ...

2// Un halo de fluorescence apparait autour des colorants du tampon de charge. On a eu le problème avec le Orange G contenu ds le tampon de Promega, avec la formation d'un halo bleu ciel assez intense qui masquait les bandes. J'ai donc refait un tampon de charge contenant uniquement du bleu de bromophenol, et là pareil, en moins intense.  [...] Qques infos qui vous aideront peut-etre à comprendre. on utilise des réactifs Promega pour faire une PCR, de l'eau ultra-pure pour les mixes, le tampon de migration, le tampon de charge et le gel. Ce sont des gels d'agarose à 1 ou 2%. Tampon de migration = TBE 0,5X.  [...]

[Biologie Moléculaire] Tampon de charge (orange G+GelRed)

Pour la préparation du tampon de charge 6X. 40 g de sucrose+ 0,25g d'Orange G dissous dans 100ml de TE.  [...] Pour le mix final. 12,5 ml de GelRed pour 1ml de tampon de charge.  [...]

[Biochimie] migration sds page

Si tes protéines migrent effectivement plus lentement que tes marqueurs ce n'est pas un problème de montage électrique ( ou de voltage/ampérage) mais un problème au niveau du resolving ou d'un tampon de charge trop concentré en glycérol.  [...] Je pense que c'est surtout un défaut de migration. En utilisant un b-mercapto neuf pour mon tampon de charge j'ai eu hier une migration nettement plus efficace. Je pense que le problème c'est surtout la quantité de glycérol dans le tampon (merci Vinc) et le fait que les lot de b-mercapto que j'avais utilisés était plus très bon.  [...]

[Biologie Moléculaire] Tampon de charge pour électrophorèse sur gel d'agarose

Le souci que je rencontre est que personne dans le labo ne sait quelle est la composition exacte du tampon de charge des échantillons pour le gel. (j'ai utilisé un aliquot laissé par la dernière personne ayant fait de la génétique au labo mais qui a depuis quitté les lieux).  [...] Pour le tris, il a pour rôle de tamponner le tampon de charge, et il n'y a qu'un seul tris. On ajoute souvent HCl pour dire qu'on a descendu le pH avec de l'HCl car le tris est basique, donc tris-HCl. Tris-NaOH c'est lorsqu'on a augmenté le pH avec du NaOH pour faire une solution encore plus basique. Pour un tampon de charge, c'est Tris-HCl.  [...]