• Santé - Tampon, Charge, ADN, Puits

[Biologie Moléculaire] échec de révélation sur gel d'agarose des produits d'ADN après purification

deuxième souci, quand j'ai essai de spoter l'ADN dans le puits de gel, il se diffuse directement en dehors de puits dans le liquide de mogration (TBE), après j'ai changé le tampon de charge, et c'était marché avec quelque échantillons.  [...] Le tampon de charge ne permet pas de précipiter l'ADN mais de le faire couler dans les puits. Êtes vous sure que vôtre système de migration ne présente pas un problème au niveau de la tension par exemple ou alors une électrode qui ne marcherait pas (est ce que ça fait des bulles).  [...]

[Biologie Cellulaire] PCR et électrophorèse

Je réalise pour la première fois une PCR et une électrophorèse qui va avec et on me demande pourquoi le tampon de la Taq est-il coloré en vert et quel est l'avantage J'ai bien compris que le tampon était indispensable au bon fonctionnement de l'enzyme, mais je ne comprend pas bien l'histoire de la couleur Pour permettre une fluorescence et donc une révélation à l'électrophorèse.  [...] Vous mélangez deux choses. il faut traditionnellement un tampon de réaction, qui permet le fonctionnement de l'enzyme, et un tampon de dépôt, qui permet de stabiliser l'ADN et de déposer l'échantillon dans le puits.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western Blot Transfert sur membrane

Alors le bleu que tu vois en bas, c'est pas du bleu de coomassie mais du tampon de charge qui entraine ton échantillon au fond du puits.  [...] Ha ben c'est peut être juste des traces de tampon de charge et pas un over transfert... mais bon j'y crois moyen. Je révèle ma membrane demain après passage à l'anticorps secondaire. La dernière fois j'avais rien.  [...]

[Biochimie] La PCR et ses petis bugs

Si tu as changé les produits de pcr il se peut que cela vienne de ton ADN... L'extraction est peut être foireuse. Si tu travaille sur le mémé adn depuis le début il s'est peut etre dégradé (reste de dnase, congélation décongélation...).  [...] Le 1 er puits contient mon ADN pur (extrait) puis les autres contiennent l'ADN plus (un réactif par puits) l'eau, le tampon, les DNTP, amorce1, amorce 2, amorce 3, amorce 4, amorce 5, amorce 6, le MgCl2, et la taq.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr-sbt

Et j'ai une autre question dont je n'ai pas la réponse. Qu'est ce qu'un tampon de charge et à quoi servent les différents composants de ce.  [...] - certains contiennent également des composants qui ont la particularité de se lier à l'ADN et d'en augmenter la densité. ainsi ton échantillon reste bien au fond du puits et ne se disperse pas dans le tampon de migration.  [...]

[Génétique] Electrophorèse-ADN

Sinon en plus du bleu de dépôt, il y a du glycérol dans votre solution afin de faire tomber l'ADN au fond de chaque puits et pour qu'il puisse migrer grâce au tampon de migration moins dense.  [...] En fait, la réponse est. rien. Classiquement le tampon de charge pour les acides nucléiques ne contient rien d'autre que des indicateurs colorés et du glycérol.  [...]

[Biologie Moléculaire] électrophorèse en champ pulsé

mon souci c'est que ca soit un prob d'ADN (pas d'ADN sur mes plugs) par contre j'ai vue une fluorescence au niveau des puits mais je ne c'est pas si ca s'interprète avec présence d'ADN ou ca se vois même avec un témoins négatif.  [...] Au niveau des puits si tu vois de la fluo (quel type de coloration utilise tu ) ca dois correspondre a de l'ADN maintenant est ce que la migration ne s'est pas bien passée Est tu sur be bien avoir orienté ton Gel As tu chargé assez d'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de gel d'agarose

Pour le depot du DNA loading buffer 10x de S prime (j'ai changé de lot durant mes manip sans changement apperent des résultats), j'en met 1/9 de mon échantillon pour optenir la dilution du tampon de charge au 1x.  [...] Sels dans l'échantillon. J'ai une fois résolu le problème par hasard en oubliant de mettre le courant après avoir chargé mon gel avec des échantillons que je savais chargés en sel. Les échantillons étaient sagement restés dans les puits pendant 4 heures et, pendant ce temps là, le sel avait eu le temps de diffuser dans le tampon.  [...]

[Biologie Moléculaire] Migration SDS page en "sourire"

si tu as des puits en rab de chaque coté, dépose du tampon sans protéines (genre laemmli dilué comme si il y avait des protéines) dans chacun des puits libres de chaque coté. Idéalement, il faut centrer les dépots et combler les puits vides de chaque coté.  [...] 2) Si on laisse des puits inoccupés par un échantillon, les protéines des puits adjacents peuvent mal migrer, c''est ce qu'on appelle 'l'effet de bordure. Ce problème est facilement réglé en mettant simplement du tampon d'échantillon (1 X) dans ces puits inutilisés.  [...]

lyse des cardiomyocytes par tampon de lyse et dilution du lysat cellulaire en protéine

J'ai lysé mes cardiomyocytes par le tampon de Karla j'ai mis 1ml par puits d'un plaque de 6 puits mais proteinés sont diluées dans le tampon de lyse je ne sais pas comment les concentré.  [...] Même si le culot n'est pas visible, il y en a souvent un - j'ai fait des centrifugations et redilutions d'amorces ADN à la chaîne fut un temps.  [...]