• Santé - Tag, Protéines, Anticorps

[Immunologie] comment doser une proteine ?

-marquage par anticorps dirigés contre tes protéines, avec des anticorps contenant une séquence d'affinité ( affinity tag, je sais pas comment le dire en français).  [...] Lorsque des personnes trouvent la bonne volonté de te répondre, tache d'être courtois et respectueux envers eux, c'est la moindre des choses. Vu l'insolence dont tu as fait preuve envers Astrobax, et en guise d'avertissement, je ferme cette discussion.   [...]

[Biochimie] western blot

est ce que quelqu'un peut me dire c'est quoi HA dans Pin1-HA sur un western blot.   [...] c'est un tag que l'on peut ajouter aux protéines afin de pouvoir les immunoprécipiter avec un anticorps anti HA (et ainsi voir quelles sont les protéines que l'on co-précipite et susceptible d'intéragir avec la protéine taggée).  [...]

[Biochimie] Immunoblotting, anticorps

Ma question porte sur les anticorps qu'ils ont utilisés... Au lieu de prendre un anticorps contre tout l'enzyme (anticorps qui existe), ils ont préféré d'abord ajouter - par clonage - une séquence tag et ensuite utiliser un anticorps contre ce tag.  [...] ben oui, l'anticorps spécifique reconnaitrait les deux, alors que l'anti tag ne reconnait que la recombinante. Comme ca tu es sur que ta construction s'exprime, et tu peux en plus purifier ta protéine en utilisant ce tag (d'ailleurs c'est peut être ce qui a été fait non ).  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique GST-Pull Down

le pulldown après c'est parce qu'on utilise des billes couplées à des anticorps qui fixent la GST et sa protéine fusionnée, on peut laver puis éluer pour concentrer la protéine d'intérêt.  [...] c'est ça. Le truc c'est qu'il n'existe pas toujours d'anticorps dirigés contre les protéines d'intérêt ou d'anticorps bien spécifiques alors que ceux qui reconnaissent la GST le sont. Il existe aussi des techniques pour récupérer la protéine sans le tag à la fin, par exemple en clonant un site de restriction SapI entre le cDNA de la prot et celui de la GST.  [...]

[Biologie Moléculaire] Purification Protéines Tag 6His

1) Les protéines se fixent mal aux billes de nickel donnant un rendement très faible, je retrouve la majorité de la protéine dans le surnageant, malgré 4 heures d'incubation. Il est possible qu'elles aient perdu leur Tag, je vais vérifier avec un anticorps cet après midi, mais si tel est le cas à quoi cela peut-il être du.  [...] Donc c'est un anticorps anti-ta protéine c'est bien ça Tu n'aurais pas un anticorps anti-6His à ton labo pour vérifier si c'est l'étiquette ou une partie de ta prot qui est dégradé.  [...]

Purification et extraction des protéines....

La protéine forme elle un homodi(poly)mère Parce que dans ce cas, tu peux caractériser la réduction des ponts s-s avec un WB sans SDS avec des fractions avant et après réduction. Maintenant, si les ponts s-s sont intrachaine, je suis d'accord que ça ne va pas être forcément de la tarte.  [...] Le [His]6 tag va vous permettre (1) de purifier et (2) de faire vos WB facilement en utilisant un anticorps dirigé contre lui plutôt que de courir contre un anticorps dirigé contre la protéine.  [...]

[Biochimie] GST pulldown

en gros l'étiquette GST permet de purifier les protéines étiquetées en utilisant des billes sur lesquelles se fixent l'étiquette. Apres avoir récupéré tes protéines, tu peux les déposer sur un gel d'acrylamide et faire un western blot avec par exemple un anticorps anti-HA.  [...] Les deux méthodes ont leurs avantages et inconvéninents. le tag myc est très petit (environ 1 kDa), par contre son utilisation est couteuse car il doit être reconnu par un anticorps. A l'inverse, le tag GST est une vraie protéine d'environ 26 kDa, dimérique (ça peut avoir des conséquences sur la cible), mais bien plus simple et moins couteuse a utiliser (l'élution se fait par le glutathion).  [...]

Interactions Protéine-Protéine

Chaque protéine a un tag différent. L'interaction est physique si tu obtient un signal en révélant avec un anticorps dirigé contre la protéine 2 alors que tu as fait une immunoprécipitation préalable avec un anticorps dirigé contre la protéine 1.  [...] Dans ce cas la pour vérifier si une interaction est physique, une coimmunoprécipitation peut suffire. Si une interaction physique est en fait une interaction directe, la méthode la plus sur pour ne pas avoir de partenaire intermédiaire est de produire les protéines in Vitro.  [...]

[Biochimie] Qu'est ce qu'un pull down?

Voilà je voudrais savoir ce qu'est un pull down en biochimie quand on parle d'interaction Proteines/Liagand.  [...] c'es une méthode qui permet d'étudier les intéractions protéine/protéine (éventuellement protéine/ligand). Le but est d' attrapper les molécules qui intéragissent avec ta protéine que tu immobilise en utilisant un anticorps ou un tag.  [...]

La production des anticorps monoclonaux

Voilà, je n'ai qu'une formation 100% chimie et je me suis orientée dans les biotechnologies. Je dois faire un projet sur la production des anticorps monoclonaux, je me suis documentée.  [...] De ce que j'ai pu comprendre, il y aurait injection dans le lapin d'une protéine de fusion { épitope -tag1} (le tag étant bien entendu une bien plus grosse protéine). L'ensemble des anticorps plasmatique seraient alors récupérés à partir du plasma de l'animal.  [...]