• Santé - Synthèse, ARN, Dégradation

[Biochimie] ADN complémentaire et séquence codante ?

Par exemple,supposons que j'aie une copie d'ARN messager d'un gène de 3000 bases azotés, mais que la séquence codante n'ait qu'une longueur de 1800 bases azotés. L'ADN complémentaire sera-t-il exactement l'inverse de cet ARNm ou bien il ne sera que l'inverse de la partie codante de l'ARNm en question.  [...] L'ADNc est un ADN complémentaire à l'ARN, normalement on fait la synthèse d'ADNc à partir des ARN pour éviter la dégradation des transcrits, car il est plus stable que les ARN.  [...]

[Biotechnologie] Comment déterminer le rendement d'une RT?

En effet, la méthode avec l'ARN de synthèse a l'air un peu plus dur à mettre en oeuvre mais j'ai peur qu'avec le dosage des acide nucléique, on mesure en même temps les nucléotides libres issues de la dégradation de l'ARN alors c'est peut-être bien la première la plus juste.  [...] mais j'ai deux remarques. si tu met un ARN de synthése l'efficacité de la transcription sur celui ci peut dans certain cas ne pas refléter l'eficacité de la RT sur l'ensemble de la population des ARN de l'echantillon.  [...]

Un prob a resoudre

Mais ca c'est tres theorique, car un codon AUG (met) n'est que tres tres tres rarement les premiers nucleotides d'un ARNm. Il faut ce que l'on appelle une sequence non traduite en 5' du codon AUG. Sans cette sequence l'efficacite d'initiation est tres faible.   [...] Chez les eucaryotes, ces ARNm sont degrades rapidement dans le noyau. Chez les procaryotes il y a un tag ajoute aux proteines en cours de synthese provenant d'un tel ARN qui provoque leur degradation.  [...]

Beljanski

Mirko Beljanski a voué une très importante partie de son travail à l'étude des acides désoxyribonucléique (ADN) et ribonucléique (ARN) qui sont les éléments fondamentaux de la cellule vivante. Il a aussi étudié la dégradation et la synthèse des proteines.  [...] Mais lorsque des personnes font du fric (et beaucoup) avec des traitements dits alternatifs, il faut recommander la plus grande prudence. De plus, il ne faut pas croire au miracle. Lorsqu'on connaît un peu mieux la biologie des maladies graves que les gogothérapeuthes prétendent si facilement soigner, on déjoue facilement les mensonges, et la manipulation présente dans leurs propos.   [...]

[Génétique] Extraction, purification et analyse d'ARN (Nanodrop et bioanalyser)

En bref,, il s'agit d'analyser l'ARN ribosomique afin de s'informer sur lintégrité de l'ARN messager (l'ARNr étant plus fragile que l'ARNm chez les eucaryotes). Savez-vous pourquoi on peut supposer cette hypothèse chez les eucaryotes mais pas chez les procaryotes Concernant la dégradation.  [...] Savez-vous pourquoi on peut supposer cette hypothèse chez les eucaryotes mais pas chez les procaryotes Concernant la dégradation... quelles en sont les effets (enfin, la dégradation, est-ce l'ARN qui est dégradé par les RNases ou est-ce du à la chaleur, un stress physique ou autre ).  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction faible qté ARN

En déposant 1 µg d'ARN en gel 1,2 % TAE (autoclavé bien que certaines RNases soient resistantes mais je n'ai pas de DEPC) sur une cuve décontaminée à la soude puis au SDS puis à de l'eau autoclavée. j'obtient des bandes 28S et 18S correctes et parfois un smear de dégradation pour les prélèvements vieillis exprès.  [...] J'ai aussi lu des arcticles où ils comparent la dégradation de l'ARN en comparant les taux de RNases restants après autoclave. Mais bon, en pratique apparemment l'autoclave suffit.  [...]

[Biologie Moléculaire] Rt-pcr

oui je fais les deux aussi, j'ai pas non plus des superbe ARN, on voit qu'il y a un peu de dégradation, mais pas énorme non plus. j'ai le kit RNAseOUT recombinant Ribonuclease Inhibitor de chez invitrogen, mais aucune concentratio d'utilisation n'est indiquée, et les publication de reference sur le site d'invitrogen indique des mode d'utilisation completement différents.  [...] si les ARN sont susceptibles de dégradation, ce que je fais c'est mettre 1µl de RNAsin dans un tube vide, puis d'éluer les ARN de ma colonne dans ce tube. Bien agiter.  [...]

ARN double-brins

Dicer reconait l'ARN double brin et le clive en fragment d'environ 22 nucleotides. Ces fragments d'ARN vont etre reconnus par un autre complexe moleculaire, le RISC (RNA-induced silencing complex) qui lui est responsable de la degradation du messager. De ce que je crois savoir, PKR est une RNA-dependent kinase et un systeme de defense non specifique, c'est a dire que cette enzyme est responsable de l'arret de traduction general lorsque des ARN double brins sont presents ce qui a laisser croire que le gene silencing chez les mammiferes seraient impossibles.  [...] La voie de l'INF active aussi une autre enzyme (2'-5'-oligoadenylate synthetase) qui provoque la degradation des ARNm de maniere non specifique par l'intermediraire de la RNase L.  [...]

[Biochimie] Synthése et dégradation des lipides ! Au secours !

Voila on vient d'avoir un cours sur la synthèse et la dégradation des lipides et notre professeur nous a posé un certain nombre de questions auquelles j'ai bien du mal à répondre.  [...] En fait le gros problème avec cet exercice c'est que ce sagouin de professeur a omis de nous donner ses diapos. Je n'ai donc pas vraiment de cours sur lequel m'appuyer et la dégradation des lipides est un univers totalement inconnu pour moi. Bref je nage donc si quelqu'un pouvais m'aider... Merci.  [...]

[Biologie Moléculaire] De l'ADNc simple brin à la ligation? ??

je travaille sur des organismes eucaryotes. j'ai fait une extraction d'ARN, une reverse transcription et maintenant j'ai de l'ADNc simple brin. ma question est la suivante. pourrait je directement faire une PCR sur cet ADNc simple brin afin de le cloner dans un vecteur (il est à savoir que les sequences nucleotidiques sont deja publiées.  [...] Maintenant pour vous rassurer, en principe tous les protocoles de reverse transcription conduisent à la formation de l'ADNc double brin. Verifiez, je suis pratiquement certain que vous ne vous êtes pas arrêté après la dégradation de l'ARN sans avoir synthétisé le complémentaire.  [...]