• Santé - Substrat, Réaction, Enzyme, Jaune

[Biologie Moléculaire] Immunohistochimie/ Immunomarquage

De ce que je me rappelle les deux termes évoquent la même chose. Et le test ELISA en est un bel exemple. On peut mettre en évidence la présence d'une protéines, Ag, etc... d'intérêt à l'aide d'anticorps primaire, secondaire couplé à une enzyme dans le cas de l'ELISA.  [...] Pose de l'anticorps primaire,rincage, anticorps secondaire couplé à une enzyme, rincage. Ensuite, tu ajoutes le substrat et atteint que la réaction se fasse. Si ta molécule d'intérêt était présente et que tous les autres Ac ont réagi alors l'enzyme couplé au secondaire réagit avec le subtrat et ta solution devient jaune.  [...]

[Biochimie] Dosage de la phosohatase alcaline d'un sérum

Je fais un laboratoire sur le dosage de la phosphatase alcaline. Le substrat de cette réaction est le para-nitrophényl phosphate qui se fait hydrolyser par l'enzyme en para-nitrophénol qui est de couleur jaune, qui se fait doser par spectrophotométrie.  [...] Une autre question... après l'incubation, on ajoute 9,9 mL de NaOH 0,02N, pour stopper la réaction. En quoi cette ajout stoppe la réaction Est ce que le NaOH dénature l'enzyme j'en doute, parce que l'enzyme fonctionne en milieu alcalin.  [...]

[Biologie Cellulaire] substrat de la phosphatase alcaline

merci j'ai finalement trouvé le substrat et effectivement il faut être à un ph alcalin pour que le produit de réaction soit ionisé (ce qui lui donne sa couleur jaune). Mais je voudrais savoir si quelqu'un a essayé le traitement d'une labteck avec ce réactif et s'il est possible de voir ainsi l'activité de la phosphatase.  [...] Le BCIP est substrat de la phosphatase alcaline qui libere une fonction reductrice indol instable qui fait se lier deux molecules du reactif et reduit le NBT, provoquant un precipite bleu.  [...]

[Immunologie] Protocole ELISA

Les puits sont ensuite rincés. si l'anticorps secondaire n'est pas fixé, il sera éliminé. On ajoute ensuite de l' eau oxygénée, substrat de l'enzyme. Si l'enzyme est présente, l'eau oxygénée sera transformée en deux molécules d'eau et la couleur de la solution sera modifiée. Le dosage se fait par spectrophotométrie.  [...] Pensez également à arrêter la réaction enzymatique avec l'ajout d'une solution acide. (changement de couleur jaune -. bleue en général).  [...]

[Biochimie] préparation d'une gamme etalon

En faite je dose une activité enzymatique avec un réactionnel composé de 125 µl de tampon, 50 µl de solution enzymatique et 75 µl de substrat pNP-glycoside.  [...] Le milieu réactionnel est incubé à 37°C pendant 10 min. La réaction est arrêtée par ajout de 2 ml de carbonate de sodium (2 %, p/v). L'activité enzymatique se manifeste par l'apparition d'une coloration jaune caractéristique du paranitrophénol (pNP) libéré dans le milieu.  [...]

[Divers] Amylosynthétase, Température condition

Après je pense qu ej'ai du avoir une mauvaise réactio pr les autre tubes car on a aps eu assez de temps pour le faire, masi devenait jaune foncé, surtt le dernier, à mon avis je pense que la stimulation de l'enzyme, au niveau de la température agit beaucoup.  [...] Pour le filtrat, qui a était bouilli logiquement je epnse que sa a accélère la réaction..donc ceci dit cela veut dire que l'enzyme y est beaucoup pour la transformation du glucose en amidon.  [...]

enzymologie- Liqueur de Fehling

Donc ma question est. si l'origine de la coloration jaune est la réaction de l'invertase avec l'acide pourquoi n'est elle pas apparue plutôt et quel est l'intérêt de la liqueur de fehling dans ce cas.  [...] Normalement la liqueur permet de mettre en évidence les produits de l'enzyme et donc son activité. Rouge brique. Je ne vois pas d'ou peut venir la couleur jaune a part une dégradation de l'enzyme.  [...]

Dégradation du glucose [1ére S]

En faisant varié le pH et la temperature, tu obtiendra different résultat... Il te suffit de trouver comment les mettre en evidence pour conclure sur le role de l'enzyme et les conditions ou son activité est optimale... (tu a un réactif, qui colore l'amidon en bleu et le glucose en jaune. ).  [...] On en déduit alors que c'est la présence d'acide chloridrique (donc la variation du pH) et l'augmentation de température qui a provoqué la réaction, donc l'activité de l'enzyme amylose.  [...]

[Biologie Moléculaire] Hydrolyse, amidon

bonjour, je suis en 1ere s et j'ai un doute. Est-ce que si on mélange dans un tube de l'amidon et de l'eau distillée pour faire du lait d'amidon peut-il y avoir une Hydrolyse même si je n'ai pas ajouté l'enzyme Puis après si j'effectue le test de fehling(en chauffant au bain marie)peut-il donner positif à la présence.  [...] Hélas ce n'est par une coupure chimique par l'eau. ce sont des enzymes ou des substances agressives (acides, bases... ) qui coupent la molécule, puis c'est la molécule d'eau qui maintient les deux morceaux séparés.  [...]

Rendement de transfection

Le D.O augmente avec la quantité de produit formé, il te permet donc de mesurer ton activité enzymatique. Le DO max te donne le pH optimal de l'enzyme, en utilisant la formule que tu as écrite tu peux avoir l'activité relative de l'enzyme à un pH donné.  [...] Avec les DO obtenues je dois calculer le rendement de transfection par rapport à la préparation qui donne l'activité la plus élevée.   [...]