• Santé - Structure, Protéine, Migration

[Biochimie] Electrophorése

je dirais qu'en conditions dénaturante les protéines ont en gros toutes la même forme et sont différenciés que sur la masse.  [...] Alors qu'en conditions non dénaturantes ils y a des différences de migration entre une protéine fibrillaire et une globulaire de même masse (la forme et la structure de la protéine joue aussi un rôle).  [...]

[Biochimie] technique PAGE non dénaturante

Bonsoir tout le monde, j'aimerais bien connaitre le principe de la technique de séparation des proteines PAGE en condition non dénaturante et quel est la différence entre PAGE et SDS page et utilités.  [...] PAGE en conditions dénaturantes. les protéines sont traitées de façon à les délier et à séparer d'éventuelles sous-unités. On détruit donc leur structure tridimensionnelle. La forme de la protéine n'intervenant plus dans la migration, celle-ci se fait uniquement sur la base de la masse de la molécule. L'interprétation est généralement plus simple.  [...]

[Biochimie] séparation de protéines

j'ai également fait une MS/MS sur ces mêmes échantillons et trouve des poids du genre 20kDa, 40kDa, 82kDa... je pense qu'il y formation de dimère lors de la migration, ou on a vraiment des protéine de ce poids... comment en être sur.  [...] quel agent utiliser (autre que le béta-mercapto) pour être sur d'avoir une structure linéaire et qu'il n'y est aucun problème polymérisation des protéine lors de la migration.  [...]

[Biologie Moléculaire] western blot / proteine hrp

Je ne comprends pas bien. On peut tout à fait faire un western avec SDS et utiliser un anticorps couplé à la péroxydase. Le SDS agit pendant la migration mais une fois que les protéines sont sur la membrane, il n'y a plus de SDS et si il en reste il disparaît avec les lavages donc aucun problème pour la péroxydase (et d'ailleurs intuitivement ça coule de source car les anticorps que vous allez utiliser, avant la péroxydase, nescessitent leur conformation 3D ce qui prouve que le SDS ne bouleverse pas la manipe une fois que l'on est sur la membrane).  [...] A priori si tu es non dénaturant tu dois conserver la structure et la fonction de la péroxydase donc j'aurai tendance à dire que c'est possible tout en sachant que la migration et le transfert vont certainement quand même abimer ta protéine. Il faut essayer... tu me tiens au courant.  [...]

Recepteur à l'insuline en SDS PAGE

Et donc, selon la distance de migration pour un type de gel donné sera associé à un rayon de Stock théorique...proportionnel à la taille de la protéine complexée par les molécules de SDS, et donc, proportionnel au poids moléculaire.  [...] Ce n'est pas le tampon de migration qui contient du beta-mercapto, c'est le tempon dans lequel est repris les protéines laemli. Cette etape, denature totalement la proteine (pont S-S compris).  [...]

[Biochimie] Modifications post traductionnelles et électrophorèse !

Juste pour une grosse proteine, nous on utilise des gels precoules 4-12%. En migrant avec du tampon MOPS. Apres une heure de migration, mes proteines a 250 kD sont environ a 2 cm des puits (le gel fait 7 cm...) donc c'est tres bien.  [...] Oui mais ça reste toujours une question de taille et non de masse, la masse découlant de la taille de la protéine. Le critère permettant la séparation des protéines est la taille, plus exactement comme disent les biophysiciens le volume hydrodynamique de la protéine qui va déterminer sa vitesse de migration au travers des mailles du gel.  [...]

Petit secret des migrations cellulaires au sein de notre corps

Leurs résultats ont confirmé leur hypothèse. En effet, leur étude publiée dans la revue Developmental cell pointe l'action essentielle d'une nouvelle protéine dans la migration cellulaire.  [...] Les résultats sont basés sur des travaux précédents, réalisés par le même laboratoire. Les chercheurs avaient montré que la protéine Exo70 intervenait dans la stimulation des filaments d'actine lors de la fabrication des vésicules d'exocytose. Cette fois, les scientifiques se sont intéressés au rôle de cette protéine lors de la migration cellulaire.  [...]

Protéine avec bcp de résidus acides migre de façon aberrante en western blot

- As-tu bien dénaturé ta protéine bouilli et utilisation de Beta mercapto (ou autre) en suffisance Car pour moi ta protéine a peut-être gardé une partie de sa structure 3D, ce qui l'empêche de passer les mailles formés par ton gel et donc de migré. Ceci pourrait en faite le bloqué avant la taille attendu.  [...] La sérine aurait une possibilité d'intéragir au niveau structurel avec un autre aa de ta séquence malgrè la présence de dénaturant Même si au moment de l'injecté elle est dénaturé, le fait que le tampon de migration dilue le composée dénaturant et imaginant que ta protéine a une vitesse de reconformation 3D rapide, alors il est possible que.  [...]

Question : analyser une protéine

Supposons que l'on connait le nom d'une protéine dans un organisme et que l'on veut identifier la structure primaire pour déterminer quel gène la code.  [...] Pour ce qui est d'analyser la séquence peptidique (structure primaire) des protéines, il y a plusieurs étapes. D'une part, il faut séparer les solutions et mélanges qui contiennent plusieurs protéines, et les purifier. La séparation de ces protéines peut s'obtenir de plusieurs façons, en fonction du poids moléculaire, de la taille, de la distribution de charges, et d'autres propriétés physico-chimiques qui vont moduler la migration de ces protéines et peuvent également varier selon les paramètres de ton milieu (pH, température, tonicité, etc.  [...]

[Biochimie] Electrophorèse en condition dénaturante et native

Alors on réalise une électrophorèse sur la Bêta-Lactoglobuline (une protéine du lactosérum) dans les conditions natives, cette dernière donne une migration en deux bandes A et B d'égales intensités mais ayant des niveaux de migrations différents. Par contre, son électrophorèse en présence de Dodécyl sulfate de sodium (SDS), donne une migration en une bande unique dont le PM est évalué à 18300 Daltons.  [...] Je pense que lors de l'électrophorèse en conditions natives, la protéine est séparée en fonction de sa charge et de son poids moléculaire(PM) d'où la migration en deux bandes A et B. Quant à son électrophorèse en présence de SDS, la séparation de la protéine est en fonction de son PM seulement, je me trompe.  [...]