• Santé - Stage, Extraction, ADN, Plante

[Biologie Moléculaire] Il y a quoi dans un kit d'extraction d'ADN?

Je dois taper mon rapport de stage et détailler deux types d'extraction d'ADN génomique de plante.  [...] Le deuxième procédé fonctionne avec des billes magnétiques qui retiennent l'ADN ce qui permet d'éliminer le milieu et de laver l'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Résultats PCR

-je manipule de l'ADN génomique qui a été purifié et visualisé dans un laboratoire très performant où toutes les conditions étaient optomisées...ce n'est pas le cas de mon laboratoire notez que le smear n'est pas apparu lors de la visualisation de mon ADN (dans le labo d'accueil) et que les bandes étaient très claires.  [...] -Oui lorsque j'étais en stage (labo d'accueil où tout allait pour le mieux), j'ai passé moi même mes ADN sur gel après leur extraction, je vais essayé de poster la photo.  [...]

Besoin d'avis pour optimiser extraction d'ADN à partir de tissu FFPE en vue d'une CGH

Dans le cadre de mon stage de Licence, je suis censé, dans un CHU, développer une méthode de CGH sur tissus FFPE (les profils, observés à l'aide du logiciel CytoGénomic, sont ininterprétables). Je dispose donc d'un protocole de base, mais, ayant commencé les manips cette semaine, malgré une extraction ayant conduit à une quantité plus que suffisante d'ADN (déterminée au nanodrop), notre marquage à la cyanine (random priming) à très mal fonctionné sur l'ADN du patient.  [...] J'ai donc fait pas mal de biblio et il semblerait (d'après Burcu Sengüven et al.. Comparison of Methods for the Extraction of DNA from Formalin-Fixed, Paraffin-Embedded Archival Tissues), que l'étape qui influence le plus la qualité de notre ADN est l'étape d'extraction.  [...]

[Biochimie] estimation de le concentration d'ADN aprés spectrophotometrie

Bonsoir, au cours de mon stage à la faculté, j'ai fais des extractions d'ADN à partir de sang humain, et aujourd'hui j'ai dosé mes echantillon par spectrophotometrie (ADN dilué au 1/100 dans du TE). Je voudrais calculer la concentration de mon ADN dans chaque echantillon, comment puis je faire à part la regle de. 1 DO correspond à 50 µg/ml.  [...] Je voudrais appliquer la formule de yumyum (plus haut) sur 2 µl d'ADN dilué dans 998µl d'eau distillé (le tout donne 1000µl), comment doit-je appliquer la règle précédemment cité si je veux trouver la concentration de ma solution en ADN.  [...]

NanoDrop vs Qubit : quelles valeurs utiliser?

Dans le cadre de mon stage, je suis amené à réaliser une purification de l'ADN extrait de tissus FFPE. Suite à ma purification, j'ai réalisé une mesure de la concentration en ADN et de la teneur en contaminants au NanoDrop, ainsi qu'une mesure au Qubit afin de déterminer la concentration en ADNdb.  [...] Concernant mon stage. je suis censé développer une méthode d'extraction à partir de tissus FFPE en vue d'une CGH. Quelles valeurs me conseilleriez vous de donner dans mon rapport La concentration au Nanodrop+celle du Qubit Seulement le Qubit Ou bien un rapport entre les deux.  [...]

Interpréter une courbe de fusion PCR

Je fais de la PCR quantitative (Sybr Green) sur le gène de l'actine. Après amplification, je réalise une courbe de fusion. Lors de l'analyse de la courbe (module Tm calling), au lieu du pic habituellement rencontré, j'ai obtenu un plateau.   [...] pour le plateau, c'est mauvais signe, mais déjà avez vous eu un signal normal en intensité (ie l'amplification a été efficace ).   [...]

[Biologie Moléculaire] Calcul pour avoir une solution d'ADN à 10ng/microlitre à partir d'une solution d'ADN à 50 nM

Ce que je ne comprend pas c'est le passage des nM au ng/microlitre. Ce n'est pas la même unité il me semble, pourtant nous avons fait une dilution comme s'il s'agissait justement d'une même unité. Est ce correct.   [...] Non ce n'est pas du tout correct. La correspondance entre la masse (en ng) et la quantité (en nM) dépend de la taille des ADN en question, plus précisément de la masse molaire des fragments considérés.  [...]

[Biologie végétale] pcr : LP/RP et LB/RP pour une plante

alors pourquoi on n'obtient pas de signal de LP/RP sur un gel pour une plante aa car apres une extraction d' ADN. dans le tube j'ai toute l'adn de la plante cad j'ai les séquences que vont tricoter les LP/RP et aussi les séquences pour LB/RP.  [...] Il semblerait que ton gène A ou a, chez tes plantes, est porté par ce type de plasmide et non dans son ADN original. On est dans un contexte de transgenèse dans ton exo.  [...]

[Biologie Moléculaire] Origine, transformation de cellules CHO

Tout d'abord je me présente. je m'appelle Martial, je suis titulaire d'un baccalauréat en Agronomie à finalité Agro-industries et biotechnologies. Actuellement, je fais une passerelle à l'ISICh de MONS (Belgique) qui me conduira au grade de Master 1 en sciences industrielles à finalité biochimie/biopharma.   [...] Ma requête est la suivante. je suis à la recherche d'informations sur les cellules ovariennes de hamster chinois (Chinese Hamster Ovary). Car mon projet a pour but de déterminer le nbre de gènes transfectés par cellules par PCR quantitative. C'est pourquoi j'ai besoin d'informations sur ces cellules afin de rédiger un rapport.   [...]

[Biologie Moléculaire] Kit Miniprep NucleoSpin Plasmid

Bonjour a tous, je suis en stage, et j'ai récemment utilisé le kit NucleoSpin Plasmid qui permet d'extraire de l'ADN plasmidique de bactéries.  [...] Super je vais regarder ça, mais je voudrait pas connaitre exactement la composition, juste savoir quel type de solution c'est, pour savoir comment elle agit sur la colonne, par exemple le tampon d'élution, par quel moyen décroche-t-il l'ADN de la colonne, etc.  [...]