• Santé - Stable, Transgene, Cellule

[Biologie Cellulaire] Compter les passages

En ce qui concerne la perte des protéines, s'il s'agit de transfectants stables, il est possible que l'expression du transgene diminue dans le temps, soit parce que les métabolites secondaires produits par la cellule inhibent le promoteur, soit parce que les cellules inactive le transgène.  [...] Le fait de décongeler un tube de cellules congelés juste après l'établissement des clones, en refaisant une sélection à l'antibio à la décongélation permet de repartir d'une culture ou toutes les cellules expriment le transgène.  [...]

[Biologie Cellulaire] Expression stable: perte du transgène

Il me semble qu'habituellement on intègre le gène de résistance et le transgène au niveau du même site, c'est à dire que les séquences homologues sont placées de part et d'autre du gène de résistance et du transgène accolés. séquence homologue 5' - gène de résistance - transgène - séquence homologue 3', pour faire simple.  [...] Tes problèmes proviennent certainement, pour les cellules CHO, de la présence d'une séquence homologue entre le gène de résistance et le transgène, excluant ainsi le transgène de l'intégration dans le génome de hamster. Pour les cellules 293, pas de séquences suffisamment homologues à une région du génome humain pour permettre l'intégration de ton matériel génétique.  [...]

[Evolution] Apparition du sonar

Sans doute pas l'écho-location, mais peut-être la communication sociale, le fitness sexuel comme chez les oiseaux, ou d'autres choses. Seulement après cela, la table était mise pour une évolution vers le système de sonar.   [...] Par servir à rien, réellement provocateur dans un contexte évolutionniste, j'entendais servir peu (encore une hypothèse car la détection des ultra-sons peut apporter un avantage évolutif même si l'espèce est incapable d'en émettre, pourquoi pas). Quand on voit que des cellules ayant un transgène intégré de façon stable arrivent à le faire sauter s'il leur sert à rien (plus de pression de sélection), la vie est clairement contre la dépense énergétique inutile.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteurs intégratif+inductible

ce qui m'étonne un peu, c'est que souvent en transitoire, il y a plusieurs copie du vecteur par cellule, donc l'expression est plus forte qu'en stable. Dans mon cas, j'observais souvent une réduction de l'expression apres etre passé en stable.  [...] Ce raisonnement n'est pas valable si la GFP n'est pas en fusion avec votre protéine, et que la GFP vous sert de controle de transfection. Dans ce cas ce serait une toxicité due à la GFP, ce qui est connue, mais pourquoi n'est elle pas présente en transitoire Dans ce cas, qu'en est il de l'expression de la GFP dans vos stables.  [...]

[Biochimie] Plein de questions de bioch

Les souris chimères (ou souris mosaïque) ont des cellules germinales portant un transgène. En revanche, leur cellules somatiques ne contiennent pas le transgène.  [...] 1. On injecte le transgène dans une cellule de morula (8-16 cellules). On prie assez fort pour que le transgène s'insèrt dans le génome (je simplifie, la prière ne fait pas tout ).  [...]

[Génétique] Construire un vecteur de transgenèse dérivé des transposons

Et est ce que tout ça a lieu dans la cellule cible, ou est ce que ce sont des étape de la transgenèse qui se font avant de toucher à la cellule cible.  [...] Bien évidement nous (étudiants) n'allons pas réaliser toutes les manipulation de la transgènese, par manque de temps (4h30 de tp par semaine pour cette option) et certainement aussi par manque de connaissances, mais nous devons être capable de comprendre le fonctionnement (et puis en plus ça m'interesse de savoir comment tout ça fonctionne).  [...]

[Génétique] Questions à propos de la thérapie génique

Après une petite recherche sur google, voici un site qui me parait intéressant. http.//ifr3.igf.cnrs.fr/plateforme/u...ir_IFR3_v2.pdf Lorsqu'on infecte une cellule avec un virus modifié, selon le type de modification qu'on a fait, il se peut que des séquences importantes manquent, nécessaires pour l'intégration du transgène par exemple.  [...] Certains virus permettent juste d'introduire le transgène dans la cellule sans pour autant l'intégrer au génome. Ce qui implique une dilution du transgène au cours des divisions cellulaires.  [...]

thérapie génique

Toute entite biologique non cellulaire, cellulaire ou multicellulaire, capable de se reproduire ou detransferer du materiel genetique y compris les virus, les viroides et les cultures de cellules vegetaleset animales.  [...] En ce qui concerne la cellule, il semblerait qu'une cellule transfectée même transitoirement soit à considérer de la même façon qu'une cellule transformée.  [...]

[Biochimie] Combient de different types de cellules dans le cerveau d´un mamifère

Je travail sur un animal transgénique dans lequel j'essaye d'exprimer une protéine dnas les cellules gliales (surtout dans les astrocytes).  [...] De plus, je pense que seule certaine cellule exprime le transgene à cause du promoteur inséré. Dans ce cas ne serait il pas plus judicieux d' essayer d' amplifier uniquement l' ARN (PCR avec un seul primer).  [...]

[Biologie Moléculaire] Gène Rapporteur

Je ne comprends pas aussi comment la localisation de la protéine peut elle débuter dans une cellule et se propager à l'organisme entier, c'est à dire que si on injecte le transgène dans une cellule donnée de l'embryon,comment va t il alors se retrouver dans une partie de ce dernier (serait ce due à la mitose asymétrique).  [...] Ce sont les localisations anatomiques et tissulaires que l'on étudie avec ces constructions. La localisation cellulaire est évidemment inétudiable avec cette approche.  [...]