• Santé - Stable, Sélection, Cellules, Vecteur

[Biotechnologie] RNA interference : siRNA, shRNA

En effet le shRNA a besoin d'un promoteur et d'autres séquences pour s'exprimer (moins ready to use que le si). On peut effectivement l'intégrer dans un vecteur adénoviral (qui ne s'intègre pas. effet transitoire) ou lentiviral (qui s'intègre, donc effet stable si on utilise une sélection des cellules ayant intégré le vecteur) ou AAV.  [...] Ces trois vecteurs sont utilisés en culture cellulaire et in vivo. Cependant, le tropisme de ces vecteurs est très variable selon le type cellulaire et la vitesse de mitose (un hépatocyte est très facile a infecter, un neurone est beaucoup moins susceptible) et l'inflammation liée a l'infection est à prendre en compte.  [...]

Stratégies d'insertion de fusions de gènes

pour repondre a ta question, je ne vois pas pourquoi tu parles de disruption, puisque l'on peut tres bien faire de l'integration ciblée sans disrupter un gene ou sans en alterer son fonctionnement. In fois l'insertion effectuée, celle-ci est stable il n'y a donc pas besoin de maintenir la pression de selection.  [...] Pour que l'insertion soit stable, comment tu fais si tu ne maintiens pas la pression de sélection notamment dans le cas d'insertion via des transposases J'arrive à comprendre qu'une insertion via un plasmide vecteur et recombinaison homologue reste stable, mais le propre de l'élément transposable n'est-il pas justement de transposer La cellule a t-elle intérêt à maintenir une insertion qui ne lui apporte rien (c'est un peu finaliste comme question, mais c'est vrai.  [...]

[Biotechnologie] Fabrication d'une protéine d'intérêt ?

- ensuite cette séquence est insérée dans des cellules (procaryotes, eucaryotes ou végétales selon les exigences demandées) par combinaison.  [...] Ensuite vous faites votre transfection de bactéries ou de cellules eucaryotes. A noter que pour les cellules eucaryotes il existe deux types de transfection, stable (le vecteur s'insère dans le génome de la cellule) ou transitoire (le vecteur reste séparé du génome et finira par être éliminé).  [...]

[Biologie Cellulaire] Sélection d'un clone stable : combien de temps ?

Je viens de me lancer dans la sélection d'un clone stable à partir de cellules C2C12. J'ai fait ma transfection et j'ai ajouté mon antibio de sélection G418 un jour aprés et j'attendais de voir mourrir mes cellules mais... rien Ca fait 3 jours Est ce normal combien de temps faut il attendre pour voir la sélection s'opérer.  [...] Je ne comprends pas très bien la question. une sélection signifie que les cellules qui sont sensibles vont mourrir au contact de l'antibio. mais si tu as transfecté avec quelque chose conférant une résistance à cet antibio, les cellules où la transfection est réussie, ne vont pas mourrir.  [...]

[Biologie Cellulaire] Transfection stable et fonctionnalité proteique

Il y a quelques temps j'ai travaillé avec des HEK transfecté de façon stable avec mon canal ionique d'intérêt (vecteur pcDNA3, selection G418).  [...] Je ne pense pas que ceci proviennent de clones multiples car si j'isole quelques clones et verifie l'expression celle ci ne change pas. J'ai essayé de diminuer l'AB et ça ne change rien.   [...]

[Biologie Cellulaire] Transfection et nombre d'intégration

Voilà je me pose la question suivante. je sais que cela dépend de la méthode de transfection, de la lignée cellulaire et du plasmide, mais prenons des éléments courants. une lignée HeLa, transfection lipofectamine, avez-vous une idée après sélection antibiotique du nombre de copies plasmidiques qui s'intègrent en moyenne dans le génome d'une cellule.  [...] Une deuxième question liée à la première. pour établir une lignée stable, compte-tenu du fait que l'on sélectionne un évènement rare, la méthode la plus pratiquée est-elle la sélection et amplification puis vérification individuelle de clones (c'est ce qui me semble le plus approprié) ou bien des gens poolent -ils leur cellules après sélection bien que celles-ci puissent avoir perdu le gène d'expression ou en posséder différents nombres de copies.  [...]

[Biologie Cellulaire] A quoi sert le co-transfert avec un vecteur de résistance à un antibiotique

En fait, on fait une co-transfection car ton plasmide ou se situe ton cDNA ne contient surement pas de gène de résistance. Dans ce cas là, si tu veux sélectionner par la suite uniquement les cellules qui ont intégré le plasmide, il te faut pouvoir les sélectionner.  [...] Pourquoi ne pas faire un stable qu'avec le vecteur codant les recepteurs et cultiver en dilution limite pour établir des clones à partir de cellules isolées sachant que la proba d'intégration est de moins de 1 sur 1 million, ce serait impossible de trouver rapidement un clone stable.  [...]

[Evolution] Apparition du sonar

Sans doute pas l'écho-location, mais peut-être la communication sociale, le fitness sexuel comme chez les oiseaux, ou d'autres choses. Seulement après cela, la table était mise pour une évolution vers le système de sonar.   [...] Par servir à rien, réellement provocateur dans un contexte évolutionniste, j'entendais servir peu (encore une hypothèse car la détection des ultra-sons peut apporter un avantage évolutif même si l'espèce est incapable d'en émettre, pourquoi pas). Quand on voit que des cellules ayant un transgène intégré de façon stable arrivent à le faire sauter s'il leur sert à rien (plus de pression de sélection), la vie est clairement contre la dépense énergétique inutile.  [...]

[Evolution] Darwin et la diversité intraspécifique

Mais la sélection naturelle prise seule est bien un moteur d'invariance, au sens où c'est un algorithme qui converge vers un point stable. L'intuition de papeyeku me semble fondée.  [...] Dans ce cas la sélection naturelle court après l'environnement, elle vise un point stable qui change plus vite qu'elle ne peut l'atteindre. c'est du tir sur cible mobile. Un cas particulier bien étudié est la course aux armements entre proie et prédateur.  [...]

évolution des espèces

ce que je veux dire c'est que si l'on suit la theorie de la séléction naturelle, tout caractère présent dans un environnement stable (chose très importante) et ce depuis plusieurs milliers d'années a necessairement une utilité parcequ'il a cout de production, a moins que la contre selection de ce caractère soit plus couteuse que son cout de production, auquel cas il a l'utilité d'un moindre cout par rapport a une contre selection.  [...] ce que je veux dire c'est que si l'on suit la theorie de la séléction naturelle, tout caractère présent dans un environnement stable (chose très importante).  [...]