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[Biologie Cellulaire] La cellule mystère.... - Page 6

Ces MDCK sont une lignée stable pour l'actine GFP. Enfin relativement stable car les cellules du haut n'ont pas un niveau d'expression au-dessus du seuil de détection.  [...] Ca ressemble à la lumiere d'un vaisseau sanguin avec un gros noyau d'une cellule endothéliale sur la paroi inferieure. Les élements au centres des hématies et à droite un leucocyte circulant. Les cellules allentour je vais reflechir.  [...]

[Biologie Cellulaire] Lignée cellulaire en suspension: killing curve et transfection stable

J'ai un léger problème dernièrement, je voudrais transformer de manière stable la lignée cellulaire Daudi qui sont donc des cellules non adhérentes. J'essaie de faire des killing curves pour la Zeocin et la Blasticidin et j'utilise pour cela des 35 mm dishes avec 3 ml de milieu.  [...] Et j'en viens a ma seconde question, lors d'une transformation stable on doit observer l'apparition de foci puis sélectionner ces derniers. Autant je vois comment faire avec une lignée cellulaire adhérente mais pour une lignée cellulaire en suspension, ça m'échappe complètement vu qu'on ne peut pas piquer les foci.  [...]

Cellules souches : une nouvelle voie pour éviter les risques de tumeurs

Les cellules souches, capables, comme celles de l' embryon, de se transformer en n'importe quel type cellulaire, mobilisent de nombreux scientifiques dans le monde depuis des années. En médecine, elles pourraient être utilisées pour reconstituer des tissus lésés, par exemple.  [...] En utilisant des rétrovirus, les chercheurs parviennent à transformer environ une cellule sur mille en cellule souche, ce qui est déjà peu. Les auteurs de l'étude, eux, ne parviennent qu'à une réussite d'une iSP pour 10.000 à 100.000 cellules traitées. Pire, il leur a fallu infecter un million de cellules pour obtenir une seule lignée stable de cellules souches.  [...]

[Biologie Cellulaire] voie de signalisation intracellulaire

Il te suffit juste de transformer génétiquement tes cellules, en y introduisant le gène de l'inhibiteur et les séquences nécessaires pour avoir un bon taux de transcription.  [...] Obtenir des lignée exprimant de manière stable l'inhibiteur ne pose pas de problèmes outre les problèmes classiques de transfection. Mais de toute façon on utiliserai juste une transfection transitoire pour ce type de manip donc les cellules perdraient vite l'expression de l'inhibiteur.  [...]

[Biologie Cellulaire] Transfection et nombre d'intégration

Voilà je me pose la question suivante. je sais que cela dépend de la méthode de transfection, de la lignée cellulaire et du plasmide, mais prenons des éléments courants. une lignée HeLa, transfection lipofectamine, avez-vous une idée après sélection antibiotique du nombre de copies plasmidiques qui s'intègrent en moyenne dans le génome d'une cellule.  [...] Une deuxième question liée à la première. pour établir une lignée stable, compte-tenu du fait que l'on sélectionne un évènement rare, la méthode la plus pratiquée est-elle la sélection et amplification puis vérification individuelle de clones (c'est ce qui me semble le plus approprié) ou bien des gens poolent -ils leur cellules après sélection bien que celles-ci puissent avoir perdu le gène d'expression ou en posséder différents nombres de copies.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transduction/transfection

Tu peux faire une lignée stable avec la lipofectamine, c'est juste que le taux de cellules transfectée est faible, et le taux de cellules ayant intégré l'ADN encore plus faible... D'où le moins rapide/moins efficace. Car avec un vecteur viral, tu auras beaucoup plus de cellules transduites et si c'est un vecteur intégratif, tes cellules qui auront été transduites vont intégrer efficacement cet ADN, ce qui n'est pas le cas avec la lipofectamine qui ne pemret pas d'intégrer l'ADN.  [...] Les cellules font aussi des recombinaisons heterologues. Pour les selectionner, on utilise generalement de la puromycine (le vecteur possede le gene de resistance). Alors seules les cellules qui auront intégré aleatoirement ce plasmide dans leur chromosome pourront survivre. On obtient donc des lignées stables.  [...]

proteine ou cellule stable ???

Pour les lignées cellulaire, je comprends un lignée stable comme une lignée exprimant stablement une protéine d'intérêt. Il faut mettre en opposition les lignées stables au lignées transitoires. Je m'explique, dans le cas d'expression hétérologue d'une protéine dans une cellule eucaryote on peut soit.  [...] Je vais te dire ce que je pense ( ce qui n'est pas forcément la pensée de l'auteur... ) les lignées cellulaires sont des lignées immortalisées (généralement par des virus comme le SV40, mais cette immortalisation n'est pas sans conséquence sur la cellule avec des changements de profil d'expression de gènes et beaucoup d'autres choses) dans l'article cité en ref 20 les auteurs ont utilisé un virus WT, alors que pour les COS-1 c'est un virus muté, le contexte de tes cellules n'est pas exactement le même ce qui pourrait entrainer ces différences de phosphorylations.  [...]

Et si les éosinophiles n'étaient pas ceux que l'on croyait ?

la production reste stable même en cas d'absence d'exposition. D'autre part, les souris ne présentant pas cette lignée cellulaire ne devenaient pas plus sensibles que leurs congénères aux infestations par des vers parasites. Ce serait plutôt l'inverse d'ailleurs, leur absence empêcherait les vers de survivre.  [...] Le scientifique états-unien explique dans un communiqué qu'il s'agit peut-être de la résultante d'une coévolution entre l'Homme et ses hôtes indésirables. Selon son hypothèse, les vers auraient pu s'adapter en modifiant le signal afin de recruter davantage d'éosinophiles, tout simplement parce que ces cellules procureraient un environnement favorable à leur survie et à leur reproduction.  [...]

[Biochimie] Interactions protéines

J'ai pu mettre en évidence (en culture cellulaire) que 2 protéines transmembranaires semblaient intéragir... Maintenant, je voudrais voir quels domaines de ces protéines pourraient intervenir dans cette intéraction... Le problème, c'est que j'y connais rien.  [...] En fait j'ai utilisé des cellules en suspension. J'ai fais des lignées stable exprimant mes protéines...(chacune d'elles sont taguée GFP ou DS-Red).  [...]

Production de Protéines recombinantes

Je suis capable de détecter ces copies surnuméraires en QPCR, les protéines par western-blot mais aucune trace quand je tente un dosage par Elisa.   [...] Est-ce qu'une personne a déjà crée une lignée stable surexprimant un facteur dans le surnageant.  [...]