• Santé - Stable, Génome, Cellule, Intérêt

Définition | Transfection | Futura Santé

Une transfection peut être stable (le matériel génétique s'insère dans le génome ) ou transitoire. La transfection a en général pour but de faire exprimer à la cellule un gène donné. Avant d'entrer dans la cellule, le gène d'intérêt est inséré dans un vecteur qui est soit un plasmide (un ADN circulaire) soit un virus.  [...] Lorsque le vecteur est viral, les cellules sont infectées par le virus qui porte le gène d'intérêt. Sinon, les cellules subissent un traitement chimique pour que leur membrane plasmique devienne plus perméable et laisse mieux entrer l'ADN. Il existe plusieurs façons d'introduire un ADN dans une cellule.  [...]

[Biotechnologie] Quelles protéines d'intérêt médicale ne peuvent être synthétisé qu'en cellule eucaryotes

Pour illustrer l'intérêt de la transfection stable d'un transgène dans une cellule de mammifère, j'aurais aimé trouvé un exemple de protéine d'intérêt médicale qui ne peut être synthétisées qu'en cellule eucaryote. J'avais pensé à l'insuline mais j'ai découvert que sa synthèse peut se faire dans des bactéries.  [...] La transfection stable permet de modifier le génome d'une cellule et de lui faire exprimer un gène d'intérêt, pas forcemment pour le produire en masse, mais plutôt pour l'étudier ou étudier son influence. Le seul inconvénient est que faire du stable n'est pas forcément évident et que ça ne fonctionne pas ou très mal pour certaines protéines mais ça reste des cas relativement rares et la plupart des gènes peuvent être transfectés en stable.  [...]

[Biologie Moléculaire] siRNA, shRNA ??

Attention, l'extinction par le shRNA n'est stable que s'il est intégré dans le génome de la cellule hôte. Lors de la transfection de shRNAs, leur séquence est présente dans un plasmide. Leur expression est donc transitoire s'il n'y a pas intégration du plasmide dans le génome.  [...] Juste une dernière précision. lorsque le shRNA est codé dans un plasmide, il n'a pas besoin d'être intégré dans le gênôme de la cellule hôte pôur être stable... Une simple pression de sélection par un antibiotique (par exemple) permet une transfection stable.  [...]

[Biotechnologie] Fabrication d'une protéine d'intérêt ?

Je n'y vois pas clair non plus dans l'insertion du gêne d'intérêt dans le génome au niveau des gênes de résistance aux antibiotiques, etc.  [...] Ensuite vous faites votre transfection de bactéries ou de cellules eucaryotes. A noter que pour les cellules eucaryotes il existe deux types de transfection, stable (le vecteur s'insère dans le génome de la cellule) ou transitoire (le vecteur reste séparé du génome et finira par être éliminé).  [...]

Différence shARN, miARN et siARN

shARN = transfection stable, ils s'intègrent dans le génome de la cellule hôte (avec possibilité de le mettre sous le contrôle d'un promoteur donné pour réguler son expression).  [...] Wikipédia. Une variété de vecteurs viraux peuvent également être utilisés pour obtenir l'expression des shRNA, notamment les AAVs, virus artificiels dérivés des adénovirus et les lentivirus. Avec les adénovirus le vecteur reste épisomal, c'est-à-dire qu'il ne s'intègre pas dans le génome de la cellule ciblée.  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide

Donc en gros tu aura une expression stable grâce à une intégration, ou une expression transitoire (3-4 jours max) sans intégration du plasmide dans le génome de la cellule.  [...] Dans ta dernière question, je suppose que tu suggère d'intégrer un plasmide dans une cellule eucaryote et de le garder en tant que tel, c'est à dire qu'il ne s'intègre pas au génome. Je pense que c'est possible de façon spontanée chez S. Cerevisiae. Pour des cellules de mammifères, cela nécessite qu'elles soient au préalable transformées avec l'antigène T de SV40, comme c'est le cas pour les cellules Cos-7.  [...]

[Biologie Moléculaire] transfection stable

Quelqu'un peut-il m'éclairer à propos du mécanisme moléculaire de la transfection stable. comment l'ADN exogène peut-il être intégré au génome de la cellule.  [...] Par exemple avec un vecteur lentiviral. il y a production d'une enzyme virale, l'intégrase, qui fusionne l'ADN exogène avec l'ADN génomique de la cellule.  [...]

Instabilité génétique : les mutations génétiques | Dossier

L'instabilité génétique d'une cellule est causée par son incapacité à maintenir son information génétique stable. Cette information est modifiée par des mutations ponctuelles, ou par des gains ou des pertes de portions entières du génome qui peuvent être des chromosomes entiers.  [...] Les cellules tumorales qui inactivent des mécanismes de maintenance du génome sont avantagées puisque leur fréquence de mutation est augmentée et elles peuvent ainsi évoluer plus rapidement. Par conséquent, une des caractéristiques des cellules cancéreuses est d'avoir une fréquence de mutation anormalement élevée par rapport à une cellule normale.  [...]

Stratégies d'insertion de fusions de gènes

Ben en fait, je parlais de disrupter la copie endogène du gène d'intérêt, pour que les facteurs de régulation ciblent notre construction et uniquement celle-ci (genre. pas de compétition)... Ou bien la copie endogène du gène rapporteur afin d'être sûre que l'activité observée soit bien dûe à notre construction et pas à une activité native (ça c'est déjà un peu plus logique, non bien qu'il soit bien sûr plus simple d'utiliser une souche déjà mutée sur le gène rapporteur...).  [...] Pour que l'insertion soit stable, comment tu fais si tu ne maintiens pas la pression de sélection notamment dans le cas d'insertion via des transposases J'arrive à comprendre qu'une insertion via un plasmide vecteur et recombinaison homologue reste stable, mais le propre de l'élément transposable n'est-il pas justement de transposer La cellule a t-elle intérêt à maintenir une insertion qui ne lui apporte rien (c'est un peu finaliste comme question, mais c'est vrai.  [...]

[Biologie Moléculaire] Q-CPCR encore !

Si tu as un gène de ménage stable, il n'est pas faux de dire que ton gène d'intéret est 2x plus exprimé. Maintenant, je suis d'accord avec toi, on peut se poser la question sur la signification biologique car le tissu exprime peu d'ARN. Est ce du au type de tissu, à une plus faible densité en cellule, en noyau Y a t il bcp de graisse, de conjonctif dans ton tissu.  [...] Je comprends ton problème, mais le truc, c'est que tu as moins d'ARN car tu as moins de cellules dans ton tissu, donc moins d'ARN. Or toi ce qui t'intéresse, c'est que savoir à quel niveau d'expression se trouve ton ARN dans une cellule donnée. Donc comparer ce niveau avec le niveau d'un gène stable, ou par défaut à une quantité X d'ARN (par ex la quantité d'ARN utilisé pour faire la RT), te permet de tenir compte de cette dilution des cellules.  [...]