• Santé - Souris, Sites, Transgene

Questions sur le Kit "genomewalking" de clontech

je vais utiliser ce kit genomewalking de clontech pour regarder les sequences flanquantes d'un transgene sur de l'adn genomique de souris modifieés, et savoir si j'ai 1 ou plusieurds sites d'insertions.  [...] Les pcrs 1er et seconde sont avec des temps d'elongation de 3 min.   [...]

Mutagenèse dirigée : un Nobel pour des souris mutantes

Le gène de résistance sert à trouver les cellules qui ont bien reçu le transgène. les cellules sans transgène meurent en présence de néomycine (figure 1). Ainsi on pourra les laisser se multiplier et augmenter les chances de survenue de la double recombinaison.  [...] Par exemple et grossièrement, on utilisera un promoteur de kératine pour inactiver un gène dans la peau. Pour parvenir à ses fins il suffit alors de générer des souris dont les deux allèles du gène d'intérêt portent deux sites loxP dans le même sens et des souris porteuses du transgène Cre.  [...]

Y a-t-il une différence entre un spécimen ogm et un non ogm ?

Ensuite, comme le dit loupsio, on peut imaginer qu'il soit otujors possible de repérer un transgène grâce aux sites de restriction qui le flanquent. Est-ce que ce sera toujours le cas, indépendamment de la méthode d'intégration Genre une intégration aléatoire Médiée par transposons.  [...] ps. dans le pire des cas, on peut toujours, une fois le transgène intégré, induire des InDels dans nos sites des restriction histoire d'effacer les traces (non). Donc j'ajoute cette condition à ma question. une seule manipulation doit être réalisée, donc seulement l'intégration du transgène (pas de manipulations ultérieures pour effacer les traces).  [...]

L'hepcidine - l'hormone du fer recherchée depuis 40 ans : son rôle capital est confirmé

De fait, l'induction chez ces souris d'une hyper-production d'hepcidine grâce à l'introduction d'un transgène prévient totalement cette surcharge.  [...] En particulier, l'hémochromatose héréditaire, la plus fréquente de toutes les maladies génétiques, semble le plus souvent due à une secrétion insuffisante d'hepcidine. Il s'ensuit qu'un traitement de ces malades par l'hepcidine, ses analogues ou des produits en augmentant la synthèse, devrait constituer dans l'avenir un traitement préventif logique de cette affection.   [...]

Nouvelle stratégie pour la thérapie génique

Il existe aussi des sites attB chez les mammifères, suggérant qu'ils puissent être utilisé comme point d'insertion pour des gènes thérapeutiques.  [...] Démontrant ainsi que l'intégrase avait bien permis l'intégration et l'expression du transgène dans les chromosomes de la souris.  [...]

[Biochimie] Plein de questions de bioch

Les souris chimères (ou souris mosaïque) ont des cellules germinales portant un transgène. En revanche, leur cellules somatiques ne contiennent pas le transgène.  [...] 4. On peut, si on le souhaite croiser les souris transgéniques entre elles histoire d'avoir des souris Tg/Tg. (cas de la mutagénèse par recombinaison homologue où l'on souhaite obtenir des souris -/-).  [...]

[Biologie Moléculaire] Trouver les codons rares d'un organisme

Du coup, je voulais savoir si vous connaissez un programme ou un site internet qui me permettrait de connaître les codons rares chez cette bactérie. Je compte y insérer cinq gènes, trois provenant de plantes et deux d'E. Coli.  [...] Si ce que tu cherches à faire c'est optimiser les codons d'un transgène il y a plein de sites internet qui font ça, moi j'utilise https.//eu.idtdna.com/CodonOpt, c'est un fournisseur d'oligos, ARN guides etc... et son outil d'optimisation de codons contient bien Corynebacterium glutamicum.  [...]

[Biologie Cellulaire] biophoton

Et je reviens aussi sur la fin de mon message. il se pourrait qu'un mécanisme de communication utile aux cellules soit détourné par le virus (encore qu'on ne voit pas bien à quoi ça lui servirait puisqu'il n'est pas transmis).   [...] mais expérimentalement, par exemple, on peut détecteur depuis l'extérieur des photons émis par un transgène luciférase situé dans l'intestin ou dans le foie d'une souris, avec bien sur un capteur ccd assez sensible et dans une chambre totalement obscure. Si la question est de savoir si ça traverse les tissus, oui ça peut (mais évidemment c'est un phénomène très dépendant de l longueur d'onde).  [...]

[Génétique] Transgenèse : altération du génome

Je me permets d'ouvrir ce sujet à propos de la transgenèse afin de vous soumettre une question. En effet, lorsqu'on souhaite créer une souris CRE tissu-spécifique (ou lors d'une transgenèse additive/classique plus généralement), comment peut-on être certain que le transgène ne provoque pas de mutation ou d'altération du génome C'est à dire, comment vérifier que malgré l'insertion (aléatoire) du transgène, le génome de l'hôte reste intact.  [...] J'avais bien pensé à la PCR, mais si l'on place un seul primer, quand s'arrête l'amplification De plus, l'amplicon en lui même ne sert à rien, alors procède-t-on à un séquençage (puis confrontation aux banques de données) pour positionner le site d'insertion du transgène.  [...]

[Biologie Moléculaire] Probleme de genotypage

Ces souris ont ete croises avec une lignee qui ont un transgene contenant EGFP a la place de l'exon 1 pour identifier les cellules en question.  [...] Maintenant, pour le genotypage cela pose un probleme car si je fais une PCR sur autour de l'exon 2, les KO ont aussi cette region via le transgene.  [...]