• Santé - Souche, Plasmide, Chromosome

[Génétique] Plasmide Hfr

Une souche Hfr ( Haute frequence de recombinaison ) est une souche ayant le plasmide sexuel intégré à son chromosome bactérien... Donc lors d'une conjugaison la souche HFR peut transmettre beaucoup de génes à la cellule F moins...Cependant ce type de croisement n'engendre pas ou très peu de bactérie F+ car il est très rare que le chromosome entier soit transmit, condition nécéssaire à l'acquisition du caractére sexuel.  [...] Mais la question qui se posera à ce moment c'est. combien de chromosomes auras la F + ainsi obtenue Parce que l'ORI de conjugaison dans une Hfr est située au milieu de l'ADN du plasmide F.  [...]

compter des cellules/marquer de l'ADN/transgenese

- lors de l'introduction du transgène dans le génome de ma cellule souche grace a un plasmide comment faire pour savoir sur quel chromosome s'est insérer le gène.  [...] Donc concrêtement, tu coupes ton plasmide circulaire grâce à un site de restriction et tu obtient ton plasmide sous forme linéaire qui peut ensuite s'insérer par recombinaison homologue.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transfert de résistance

Je cherche à savoir si gène de résistance à un aminoglycoside est porté par le chromosome ou un plasmide. Dans la littérature, il semble que les 2 soit possible.  [...] Je me dit soit le plasmide n'à rien à voir avec la résistance (mais j'en revient au 1er problème, comment mon transconjugant est devenu résistant), soit le plasmide n'est pas exprimer correctement par ma souche, soit il est létale. Le problème ici c'est que je ne sait pas comment aller plus loin.  [...]

Plasmides

Je ne crois pas que le plasmide en entier puisse s'inserer dans l'ADN directement et y rester stable de nombreuses generations. En revanche, certaines regions portées par des plasmides comme des integrons ou des transposons peuvent sauter et se retrouver dans le chromosome de la cellule hote.  [...] Quant à son mode de réplication, il peut être relaché (independant de la réplication du chromosome) mais ce n'est pas toujours le cas, ainsi S. meliloti possède 2 Mégaplasmides se répliquant avec le chromosome. De plus, chez cette bactérie, on ne peut pas affirmer que ses plasmides soient 'accessoires' dans la mesure où (1) il n'existe pas de souche sans ces plasmides (2) ils codent pour des fonctions essentielles comme la symbiose avec des plantes.  [...]

[Génétique] Manipulation génétique chez procaryote

L'analyse de restriction des fragments chromosomiques inseres dans chacun des plasmides recombinants laisse penser que la meme region chromosomique a ete a chaque fois cloné. Un de ces plasmides, nommée pL31 est gardé pour une étude plus detaillée.  [...] Le plasmide pL31 est introduit par transformation dans la souche L4 qui contient une mutation conditionnelle dnaAts(thermosensible). La souche L4/pL31 est cultivée a 30°C dans un milieu riche sans ampicilline, pendant 6 heures.puis une partie de la culture est transfere à 42°C,pendant 16h,l'autre partie etant maintenue à 30°C.  [...]

Génétique et levures

Je suis chez la levure saccharomyces cerevisiae, je considère les gènes. URA3 (permet la synthèse de l'uracile) et LEU2(pareil pour la leucine) sur deux chromosomes independants, j'ai un mutant ura-, leu- et une souche sauvage. J'introduit un plasmide contenant ura+ et leu+ dans les mutants.  [...] Lorsque le plasmide s'incorpore au locus ura3 il incorpore aussi leu + on a donc un chromosome ura+ leu+ et un chromosome leu-, à ce stade il y a diploidie pour le gène leu. Le croisement avec le sauvage (qui contient 1 chromosome ura+ et un chromosome leu+) donnera un diploide qui après méiose donnera les spores.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR colonie et PCR ADN

-La souche bactérienne est différente. En effet je travaillais sur des TOP10 avant, et là je suis sur BL21. Problème de BL21 par rapport à ce plasmide/insert.  [...] Quand tu dis que le plasmide est présent seul dans la miniprep, sais tu si il est sous forme linéaire ou circularisé par la ligation. (Une digestion avec une seule enzyme devrait donner 2 fragments si il est linéaire). Imaginons que la ligation ne fasse que circulariser le plasmide sans introduire l'insert, ça pourrait conférer la résistance et la PCR positive proviendrait de l'insert qui est transformé en même temps.  [...]

[Biologie Moléculaire] Recherche plasmide naturel

Bonjour, je souhaite extraire un plasmide naturel à partir d'une bactérie classique de façon à l'observer lors d'une électrophorèse. Est-ce que le plasmide ColE1 est toujours naturellement présent chez n'importe quelle souche d'E. coli Quelle autre souche bactérienne pourriez vous me suggérer pour récupérer des plasmides.  [...] colE1 n'est pas présent dans toutes les souches d'E.coli et toutes les souches n'ont pas forcément un plasmide. Vous pouvez isoler plusieurs dizaines d'E.coli de différentes sources, extraire l'ADN totale, tenter une transfo dans une coli de laboratoire et vous verrez si vous obtenez des plasmides.  [...]

[Biologie Moléculaire] Immunodétection après production d'une protéine recombinante

Lors d un TP nous avons transformé une souche E coli (rosetta) avec un plasmide recombinant afin de produire et purifier une proteine d interet. L expression du gene de cette proteine est sous la dependance du promoteur T7, et necessite ainsi l arn pol T7.  [...] Tous les binome n ont pas utilisé les mm vecteurs et systemes d expression, mais certains ayant aussi utilisé un systeme comportant le plasmide pLysS (contenant l adn codant pour le lysozyme) detectent aussi une bande intense correspondant au lysozyme...bref, le soucis c est que je n arrive pas a l expliquer.-s.  [...]

[Biologie Moléculaire] probléme competence au Cacl2

J'ai essayé la souche JM109 et Top10F' et XL1 Blue et a chaque fois je trouve rien sur les boites ensemmencées par les bacterie compétentes transformées par le 1 ul du plasmide PICZ.Mes boites pour la souche XL1 blue par exemple contiennent du milieu LB low Salt + tetracycline (resistance de XL1) + zeocine (resistance conférée par le plasmide).  [...] En fait, j ai soupçonné la solution de cacl2 qui peut etre degradée ou qq chose comme ça et donc j ai preparé une solution stock 1M filtrée que je dilue au 1/10 pour chaque utilisation (0.1M).   [...]