• Santé - Sondes, ARN, Hybridation

[Biologie Moléculaire] intensification du signal en hybridation in situ

[Biologie Moléculaire] intensification du signal en hybridation in situ.  [...] J'ai certaines sondes en S35 très pâle en hybridation (ARN-ARN) et j'aimerais intensifié le signal. Avez-vous des trucs.  [...]

[Biochimie] élaboration de sondes!

SVp j'arrive pas à comprendre les 4 premiéres cases à partir du haut dece schéma.. il s'agit du protocole d'élaboration de sondes ARN pour une hybridation in situ.  [...]

[Biologie Moléculaire] Quand faut-il une amorce?

Les arn, une fois formés, sont pris en charge par un bon nombre de protéines qui vont s'occuper d'euxi(maturation, délocalisation.. différentes selon le type d'ARN).  [...] On peut différencier entre une amorce d'ADN ou d'ARN en utilisant des sondes radioactifs approprier ou avec hybridation moléculaire.Sourthern blot ou Northen blot.  [...]

[Identification] taxonomie moléculaire

moi j'ai trouver.l'hybridation ADN-ADN,ADN-ARN,mesure de GCp.cent,etudes des ARNr,des méthodes sans amplification de la cible (utilisation des sondes.  [...] il s'agit plus d'une question de précision que de performance, mais on n'a pas forcément tout le temps besoin de connaitre la séquence nucléotidique en entier, une hybridation suffit.  [...]

[Biologie Moléculaire] Rt-pcr

La rt-PCR est une des techniques pour détecter la présence ou l'absence d'un messager particulier. En effet les ARN sont présents en petite quantité et ne sont pas facilement détectables ni quantifiables de façon spécifique (sauf hybridation par sondes, etc.  [...] Malheureusement les enzymes utilisées en PCR ne sont pas capables de prendre comme matrice un brin d'ARN. La solution est donc d'utiliser une enzyme qui synthétise un brin d'ADN complémentaire de ton ARN, ce brin pouvant ensuite etre utilisé comme matrice pour l'amplification.  [...]

quantification sonde HIS

salut, a cause d'un oublie malheureux dans mon manuscript de these je suis en galere. Voila j'ai l'habitude de quantifier mes sondes ARN pour l'hybridation in situ avec une migration sur gel, basée sur l'estimation visuel de la production de sonde par rapport a la quantité initiale de plasmide.  [...] DU genre le signal est X fois plus fort. Ensuite je convertisait le tout en ng/microL/Kb a l'aide d'une formule un peu compliquée dont je ne me souviens plus.   [...]

[Biologie Moléculaire] Transcription in vitro de sondes ARN marquées

j'aurai bien besoin de l'avis d'un expert en biologie moléculaire. Je cherche à synthétiser des sondes ARN marquées à la DIG ou à la biotine pour faire de l'hybridation in situ.  [...] Enfin bon, je lance ma transcription et j'ai des super rendements, les DO sont impeccables. Par contre à la migration de ces ARN après purification (lithium/ethanol) je vois des smears, et quelques bandes secondaires apparaitre. Le poids moléculaire de mes transcrits est aussi plus haut qu'attendu (peut-être à cause de la DIG ou de la biotine ).  [...]

[Biologie moléculaire] Linéarisation de vecteur PGEMt pour faire des sondes HIS

J'ai une petite question concernant le vecteur PGEMt. Ce vecteur comprend un site multiple de clonage (avec mon insert d'intérêt) ainsi que des sites d'initiation de la transcription T7 et SP6. Je me demandais s'il était nécessaire de linéariser le plasmide avant de faire agir les polymérases SP6 et T7 ou bien s'il est prévu dans le plasmide des sites d'arrêt de transcription.   [...] L'objectif étant de faire des sondes d'hybridation in situ ARN, et donc de transcrire le fragment d'ADN inséré.  [...]

[Biologie Moléculaire] Hybridation ARNm

Je dois faire une hybridation in situ d'ARNm ou peut être de miR sur des coupes de tumeurs, mais je m'interroge sur les temps d'hybridation nécessaire étant donné que mes sondes n'auront pas du tout la même taille.  [...] Pour les ARNm j'utiliserai des sondes de 100 à 500 bases et pour les miR des sondes d'environ 20 bases, quelle devrait être l'ordre de grandeurs des temps d'hybridation.  [...]

[Biologie Moléculaire] hybridation in situ

est ce que je doit réaliser PCR avec ces sondes mais sans marquage avant de réaliser l'hybridation in situ pour obtenir Tm exacte d'hybridation.  [...] et en général il faut placer la température d'hybridation un peu en dessous du Tm des sondes pour s'assurer une bonne hybridation, mais pas trop en dessous pour éviter l'hybridation non spécifique.  [...]