• Santé - Sonde, Hybride, ARN

biologie moléculaire

si ta sonde hybride les ARN (les duplex ARN/ADN ca existe ), ca vient juste représenter la différence d'expression des gènes dans les différentes celulles,  [...]

ARN-ADNc

Il me semble que la Reverse Transcriptase effectue également la synthèse d'un brin complémentaire d'ADN, et ne laisse pas en place un hybride ARN/ADN.  [...] C'est ce que je pensais, or vu que pour mon étape de RT je ne chauffe pas (je fais qu'une élongation à 37°C), je considerais que j'avais un hybride ARN-ADNc. Je ne savais pas que les RT avaient une activité RNAse H. L'ARN hybridé à l'ADNc est donc dégradé.  [...]

[Biologie Cellulaire] transcription comment mettre en évidence la non présence d'intron

Je pensais prendre une collection de trois ou quatre sondes chaudes plus courte, complémentaire à des parties différentes de l'ARN de ce gène. Hybridé, puis faire un blot, et autoradiographie.  [...] Si effectivement il n'y a pas d'introns alors pour chaque piste on aura une seule bande, toujours à 2,6 kb. (si il y a un ou des introns, on aurait plusieurs bandes, ou peut être même aucune, si une des sondes est complémentaire d'une partie intronique).  [...]

Triple hybride

Est ce que vous connaissez une technique qui permettrait de mettre en évidence une intéraction entre 3 protéines, elles même en intéraction avec de l'ADN Bien sûr sans passer par le double hybride...(sinon c'est trop facile ).  [...] le triple hybride c'est pour mettre en evidence des proteines interagissant avec un ARN non Je vois mal l'apport dans le cadre d'une etude d'interaction avec de l'ADN.  [...]

Un problème de northern blot !

Les chercheurs de la publication réalisent un northern blot pour mettre en évidence la présence d'ARNm patB (hybridé avec une sonde), mais réalisent dans un second temps un northern blot témoin à l'aide d'ARNr 23S. Les données concernant l'ARNm patB sont ensuite dits normalisés par l'ARNr 23S et livrés sous forme de graphique.  [...] bref cela te sert a t'assurer que les variations eventuelles (ou l'absence de variations) sont bien liees a des regulations de l'ARNm et non pas a des problemes techniques lors du Northen.   [...]

Sequence 5' pour un ADNc en Southern Blot

salut, je ne suis pas sure mais le probleme me parrait beaucoup plus simple que ca. quoique c'est pas trés clair..quand tu dit une sonde 5'.qui s'hybride avec l'extrémité 5' de l'adn c ou g...ou bien tu parle de sonde marqué à son extrémité 5'...parceque si c'est le cas ca change tout.  [...] Merci cela comforte l'hypothese que javais formulé. le probleme venant du fait que j'avais oublié que la sonde ne s'hybridé pas avec la sequence 5' Utr.  [...]

[Biologie Moléculaire] Interprétation d'un Southern Blot

Un Southern est réalisé sur de l'ADNg de trois rats mâles digéré par ECO R1. Le rat 1 est sain alors que les deux autres ont une maladie génétique associée à un gène G situé sur le chromosome X. On hybride la membrane avec une sonde d'ADNc de 500pb correspondant au gène en question.  [...] Et enfin, pour le rat 3, l'explication me semble plus simple. une mutation ponctuelle, ou l'addition ou suppression d'un seul nucléotide ne génèrerait pas suffisemment de mésappariement pour que la sonde ne s'hybride pas, et donc le nombre et la taille des bandes ne varie pas. Juste.  [...]

[Journal club] Extinction de l'expression de gènes par les siRNA : la découverte

Personnellement je connais mfold comme programme de prédiction et c'est tout. Le problème n'est pas sépcifique à l'interférence ARN. On a le même problème en in situ où il nous faut souvent tester plusieurs sondes avant d'en trouver une qui hybride bien ce que l'on souhaite.  [...] D'ailleurs, en in situ on a régulièrement à faire à du bruit de fond, résultat d'hybridations aspécifiques. Qu'en est il pour l'interférence ARN Comment établir la spécificité de la réaction.  [...]

[Biologie Moléculaire] transcription ADN en ARN

La bulle de transcription a une taille d'une quinzaine de paires de bases. Il y a bien formation d'un hybride ADN/ARN d'environ 8 paires de bases entre l'ARN transcrit et le brin d'ADN complémentaire.  [...] Au fur et à mesure que l'ARN pol transcrit, il y a ouverture de la double hélice d'ADN à l'avant, fermeture de la double hélice à l'arrière et séparation de l'hybride ADN/ARN.  [...]

FISH et mise en évidence de maladies géniques

à votre avis, est-ce que la technique de FISH qui utilise l'hybridation de sondes complémentaires d'une séquence d'intéret permet de mettre en évidence une mutation ponctuelle.  [...] =. car peut-être n'est-elle pas assez précise, et du coup la sonde s'hybride qd meme, meme s'il y a une base de différence...ou peut-etre que une si petite différence peut iout de meme etre mise en évidence par cette technique.  [...]