• Santé - Sonde, ARNm, Protéine

OGM (l'identification du/des gènes intéressant(s))

càd. on a le comportement d'une plante qui nous interesse par exemple, on trouve la proteine qui est à l'origine de ce comportement comment fait on ensuite pour trouver le gène correspondant (étant donné que pour plusieurs combinaisons de nucléotides on peut avoir le même acide aminé).  [...] Pour remonter au gène d'interet, ne serait il pas possible de partir de la protéine, recreer une sequence ARNm en lisant le code génétique à l'envers, et de se servir de cette séquence comme d'une sonde (si on la rend par exemple détéctable par radioA) et d'hybrider cette dernière dans le génome de l'individu que l'on étudie.  [...]

Etudier l'expression d'ARN non codants

En ce qui concerne les ARNm il est facile de répondre le western blot puisqu'il y aura une protéine. Ou bien la RT-PCR avec une sonde poly-T puisqu'ils ont une queue poly-A (pour la plupart).  [...] Mais en ce qui concerne les ARN sans queue poly-A, par exemple les ARNm d'histone ou bien des longs ARN non codants comment faire au niveau de la RT-PCR Pas de sonde poly-T possible du coup.  [...]

[Génétique] Obtention de sonde plasmide

Le prof nous demande de simuler l'insertion dans un vecteur de clonage d'une sonde à partir de l'ARNm de la protéine.  [...] 2) Je ne trouve aucun enzyme de restriction qui corresponde entre mon ARNm et les différents vecteur de clonage disponible sur le marché. Comment faire Selon mon prof c'est très simple (pour lui tout est simple) il suffit juste de choisir un plasmide et deux enzymes de restriction au pif, et de rajouter les nucleotides correspondant aux 2 bout de ma sonde. Comment je fais ca moi.  [...]

Isoler un ARNm

Bon alors le mieux c'est de lyser les cellules par les méthodes classiques, avec en plus un inhibiteur des RNases. Après tu fais une centri (10000rmp pendant 10-15 minutes) pour enlever les membrane et les organites. Après le mieux est de faire agir une DNase après avoir fait agir un dénaturant de protéines (SDS, beta-mercapto,  [...] ..) qui enlèvera les protéines liées à l'ADN pour mieux le dégrader. Avec ce que tu récupère (ARN plus ou moins purs), tu peux ensuite faire un gel dénaturant puis hybrider une sonde spécifique de l'ARNm que tu veux purifier (Northern). Tu auras donc une seule bande si ta sonde est assez spécifique et que tu n'as pas perdu ton ARNm en cours de route (normalement non ).  [...]

HPLC sur des protéines déjà dénaturées

Je m'explique. J'ai marqué ma protéine avec une sonde fluorescente. Dans le processus, la protéine est dénaturée (c'est voulu). Je souhaite ensuite savoir combien (en pourcentage) de protéines j'ai marqué.  [...] On sépare ainsi facilement l'excès de sonde fluorescente, de la protéine marquée mais, par contre, la séparation protéine native/protéine marquée x fois est mauvaise. On détermine approximativement le taux de greffage par analyse du spectre MS déconvolué.  [...]

[Biotechnologie] Global Analysis of Protein Activities using proteome chips

Concernant les figures, la figure 2A correspond au test de la calmoduine et les PI (ce sont les lipides) et PC (). De plus la sonde (alpha-GST) nous permet juste d'observé la zone étudier de protéine.  [...] Pas tout à fait. ils ajoutent en fait une sonde qui détecte tout les fragments GST. Cela leur sert de contrôle, et ainsi de vérifier la présence (ou l'absence) de leur protéine. Cela doit également leur permettre de faire une étude semi quantitative (d'où le strong et weak).  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique d'hybridation

Je pense qu'il pourrait s'agir de la transcription inverse cependant un détail m'intrigue. l'hybridation de la sonde d'ADN monocaténaire sur des ARNm séparés par électrophorèse. La transcription inverse s'effectue dans un tube sans que les ARN aient été séparés auparavant.  [...] Si les ARNm sont d'abord séparés par éléctrophorèse et qu'on utilise une sonde ADN marqués monocaténaire, il s'agit alors d'un northern blot qui permet de détecter un ARNm parmi les autres sans réaction de transcription inverse derrière. Northern blot et transcription inverse ne se réalise jamais en même temps.  [...]

[Biochimie] Destruction des ponts disulfure

Je cherche à détruire (ou oxyder) les ponts disulfure d'un mélange de protéine, et ce d'une façon que je puisse ensuite ajouter ma sonde fluorescente qui reconnait les thiols (extrémité S-H). Et pour compliquer les choses un peu plus, je ne peux pas avoir plus de 2 étapes, ne peut pas chauffer au delà de 50-60°C, et je préférerai que ma sonde fluorescente reste fluorescente. Oui, un vrai challenge.  [...] Autre info. j'utilise également en parallèle une sonde succinimidyl 488 qui reconnait les résidues amines des protéines.  [...]

[Génétique] Retard sur gel

Perso si c'est possible je verrais 1 la sonde, 2 la sonde + un facteur de transcription, et 3 la sonde + le ft + une protéine couplé au FT.  [...] En gros les retards sur gel sont assez chiant a interpreter, c'est pour ca que tu dois faire une piste d'ADN sans proteine, et differentes concentration de ta proteine. Sinon tu ne peux pas conclure grand chose.  [...]

[Microbiologie] le screening

bonjour a tous svp j'ai besoin daide,j'ai un exposé sur les methodes de recherche de nouvelles souches et je ne comprend pas c quoi le screening et il contient combien d'etapes j'ai trouvé qu'il ya un screening primaire et secondaire alors que je sais meme pas comment ça se deroule.   [...] Si ta banque est clonée dans un vecteur d'expression tu peux utiliser un AC préalablement marqué (marquage froid en général).   [...]