• Santé - Sonde, ADN, Révélation

problèmes de Northern

On a utilisé une sonde actine, purification sur colonne sephadex, et on se retrouve après révélation avec un profil uniquement ARN, pas d'ADN.  [...] Le forum Pr ésentez-vous, comme son nom l'indique, sert uniquement aux messages de pr ésentation des nouveaux membres. Seules les modérateurs peuvent répondre aux fils qui y sont ouverts.   [...]

dot blot- southern blot

Le southern est une technique de mise en évidence d'une séquence d'ADN. Il suffit de faire migrer l'ADN sur gel d'agarose, ensuite on fait une migration sur membrane, puis une révélation avec une sonde marqué.  [...] Cette technique a été mis au point par monsieur Southern, par la suite, pour la recherche des ARN et des protéines, le northern et southern ont été mis au point, et le nom est donc une blague par rapport au nom de Southern.   [...]

[Biologie Moléculaire] probleme de signal southern

Je suis déséspérée. Voila bien 6 mois que j'essaye d'améliorer le signal de ma sonde ADN marquée pour la révélation de mes southern blot.  [...] Quand je faisais mes southern, je les faisais avec une sonde marquee sur toute la longueur (elle etait plus longue d'ailleurs) avec un kit de chez Amersham. Mais normalement la dig marche bien, c'est ce que j'utilisais pour les EMSA. Tu as fais une quantification de ton marquage de la sonde (dilution en serie de ta sonde et revelation pour voir ou se trouve ton meilleur signal) Tu as essaye de faire synthetiser ta sonde directement avec la dig.  [...]

[Biochimie] PCR & Southern Blot

PCR et Southern ne sont pas utiliser dans le même but mais ils peuvent être fait de façon complémentaire. Pour ce qui est de la révélation lors du southern effectivement la sonde doit être marqué (pas obligatoirement par radioactivité d'ailleurs). Pour la PCR les fragment amplifié sont visualiser après migration sur gel d'agarose contenant du BET (bromure d'ethidium), c'est une molecule qui s'intercale entre les base de l'ADN qui devient fluorescent sous UV.  [...] La PCR prend entre 1/2 et 1 journée (amplif + verif sur gel) alors que pour le southern il faut compter entre 2 et 3 jours (digestion génomik, migration, transfert, hybridation, révelation).  [...]

[Biologie Moléculaire] échec de révélation sur gel d'agarose des produits d'ADN après purification

[Biologie Moléculaire] échec de révélation sur gel d'agarose des produits d'ADN après purification.  [...] deuxième souci, quand j'ai essai de spoter l'ADN dans le puits de gel, il se diffuse directement en dehors de puits dans le liquide de mogration (TBE), après j'ai changé le tampon de charge, et c'était marché avec quelque échantillons.  [...]

[Divers] révélation d'une sonde couplée à la peroxydase

Cette variante de la technique classique du FISH utilise des sondes couplées à la peroxydase ce qui permet, après la première étape d'hybridation ARNr16S-sonde, de réaliser une amplification du signal en utilisant des tyramides fluorescentes.  [...] Si un de vous a déjà essayé ceci, ou alors un autre système d'amplification du signal à partir de peroxydase (sur sonde ou anticorps), j'aimerais bien avoir votre avec avis avant de me lancer dans cette manip.  [...]

Hybridations plasmides et sondes

pour faire court tu construit un acide nucléique qui pourra etre ensuite encapsidé. Le phage est alors mis en présence de bactéries et il agit alors comme tout bon virus en injectant son ADN à l'intérieur de la bactérie qu il rencontre. Il présente l'intéret d'être un système d'injection propre tandis que avec les plasmides c'est un peu plus délicat.  [...] Le reel clonage se situe en amont de la premiere manip. Il correspond en fait a une manipulation de l'ADN (en vue de l'insertion dans un plasmide par exemple). Evidemment, suite a ton clonage tu auras besoin de transformer des bacteries puis de verifier ton clonage (manip 1, 2 et 3).  [...]

[Biologie Moléculaire] Révélation des extraits d'ADN

Bref, la suite logique c'est bien sure la révélation sur un gel d'agarose, seulement voilà, aujourd'hui après avoir placé mon gel dans la cuve j'ai obtenu de grosses taches bleues qui ne ressemble aucunement au profil auquel je m'attendais.  [...] Mais vous avez mis du bleu de charge dans vos ADN non Les bandes bleues c'est en vision directe ou après une quelconque révélation que vous n'expliquez pas.  [...]

[Biologie Moléculaire] le gel idéal??

j'avais précisé dans un post précédent que j'avais effectué une extraction d'ADN qui n'avais rien donné à la 1ère révélation. aujourd'hui je voulais m'en assurer en préparant un autre gel, le problème c'est qu'hier je n'ai obtenue aucune fluorescence contrairement à aujourd'hui.  [...] PS. Si tu avais posé ces questions dans la discussion que tu avais déjà créé pour l'occasion (révélation extraits ADN) ça aurait été mieux puisque les deux discussions traite la même expérience. Ainsi les réponses aurait eu plus de chance d'être complètes et pertinentes. Tu le sauras pour la prochaine fois.  [...]

[Biochimie] Analyse de l'expression du gène fos

Ensuite. hybridation et revelation avec marquage de la sonde fos et gapdh par incorporation de Dig-UTP (d'ailleurs on ne sait pas ce qu'est Dig UTP) puis préhybridation et hybridation.  [...] Il y a sans doute une erreur qui vous échappe dans l'annotation de puits et les sondes utilisés (ou même une erreur de manipulation et/ou mélange ou inversement des échantillons par exemple..).  [...]