• Santé - Sonde, ADN, Intérêt

[Biologie Moléculaire] l'hybridation d'une sonde

Une sonde est une séquence d'ADN ou d'ARN qui va se fixer in vitro ou in situ sur sa séquence complémentaire. Cela est utilisé pour différentes techniques comme le Northern Blot pour quantifier une séquence d'intérêt ou comme en hybridation in situ pour déterminer la localisation de cette séquence dans une cellule par exemple.  [...] Une sonde est une séquence d'acides nucléiques qui est complémentaire à un brin d'ADN mono-caténaire que tu souhaites marquer. C'est à dire que les bases nucléiques de la sonde et celle de ton ADN d'intérêt sont complémentaires. (par exemple, chaque fois qu'il y aura un C dans ton ADN, il y aura un G dans ta sonde, et inversement...).  [...]

Définition | Oligonucléotide | Futura Santé

les oligonucléotides servent de sondes dans les expériences de Southern blot. par exemple, on peut utiliser des oligonucléotides marqués radioactivement avec du 32 P, et complémentaires d'une séquence d'ADN d'un gène d'intérêt. La sonde sert à isoler le gène recherché dans un mélange de fragments d'ADN.  [...] les oligonucléotides de synthèse servent aussi à la mutagenèse dirigée. pour cela, un oligonucléotide contenant une petite séquence modifiée d'un gène est utilisé comme amorce pour répliquer le gène d'intérêt. L'amorce s' hybride au gène normal et permettra l'insertion d'une mutation dans le gène après réplication.  [...]

[Biologie Moléculaire] Southern blot !!!

je ne crois pas que l'adn de saumon soit en quantité saturante. Il ne faut pas oublier que ton fragment d'intérêt a migré sur un gel, et est donc concentré sur une petite surface, ce qui n'est pas le cas de l'adn de sperme. Je seche un peu quand même parce que c'est plus vraiment une technique d'actualité.  [...] le but de la sonde est de detecter l'adn d'interet, alors pourquoi la préhybridation vu qu'elle va s'hybrider avec notre adn recherché.  [...]

[Biochimie] Question sur la biotechnologie

Le criblage te permet de retrouver ta séquence d'intérêt dans une banque. En effet une banque est très vaste (environ 3000 clones pour couvrir le génome de E. coli et presque 100 000 pour couvrir le génome de D. melanogaster ) donc on a besoin d'une méthode qui identifie en une seule fois le ou les clones qui portent la séquence d'intérêt.  [...] Une méthode simple de criblage est l'hybridation sur membrane avec une sonde radioactive. Par exemple, si tu as réalisé ta banque par clonage avec des plasmides chez E. coli, tu fais une réplique des boîtes de Petri contenant la banque sur une membrane de nitrocellulose, tu soumets la membrane à l'action de la soude (qui lyse les bactéries et dénature l'ADN), ensuite tu incube la membrane avec une sonde radioactive complémentaire de ta séquence d'intérêt, puis tu révèles par autoradiographie.  [...]

[Biotechnologie] Technique de screening

On a à la base une librairie de phage contenant différents morceaux d'ADN. On est intéressé par l'un de ces fragments, dont on connait une partie de la séquence. Donc on réparti tout ça sur un gazon bactérien et on incube. Les phages qui ont infecté des bactéries vont créer des plaques.  [...] Après incubation, on place une membrane en nitrocellulose sur le dessus, en marquant son orientation et ensuite on va essayer de détecter les phages avec des sonde ADN radio-marquées (dirigées contre la séquence d'intérêt). Ainsi, on sait où se trouve notre phage dans notre gazon bactérien et on peut le prélever.  [...]

[Biologie Moléculaire] Construction d'une banque d'ADNc

La méthode que Delirium m'a gentiement indiqué permet directement une sélection spécifique de l'Adnc avant clonage puisqu'on utilise des amorces spécifiques lors de l'amplification mais la sélection des clones d'intérêt au sein d'une banque d'adn na se fait-elle pas ensuite (une fois la banque construite) par criblage (hybridation avec une sonde specifique) où bien quel est l'intérêt de la banque.  [...] Quand on veut cribler une banque d'ADNc avec une sonde ADN marquée, il faut dénaturer avant le vecteur (le plasmide par exemple).  [...]

[Biologie Moléculaire] révélation RFLP

concernant l'utilisation des RFLP dans le diagnostic génotypique cette methode necessite le couple sonde/ enzyme de restriction, cela réfère a la technique southern blot, mais cette technique est très lourde. est ce qu'il ya un autre moyen pour rééler les RFLP.  [...] SI c'est une simple RFLP, je ne vois pas l'intérêt de la sonde. Une fois la digestion par l'enzyme effectuée, une simple migration sur gel d'agarose avec un argent marquant l'ADN devrait suffire à visualiser les fragments et à donner une bonne idée de leur taille.  [...]

[Immunologie] [Cyto"gramme"] abs & ordonnée?

Arf, en fait je crois que je commence à comprendre l'intérêt de la manoeuvre. c'est nous faire toucher du doigt ce cycle cellulaire justement.. (que je ne comprends pas très bien, même s'il nous dit sans cesse que c'est élémentaire).  [...] Si je comprends bien c'est que la BrdU s'insère dans la double hélice en phase S, par l'intermédiaire d'une sonde, qui est une portion d'ADN... Et cette portion d'ADN-sonde qu'on a greffé en quelque sorte sur les ADNs natifs, on peut y adjoindre un des fluorochromes (via anticorps sur brome), avec par exemple en l'occurrence du FITC... (coloration verte.).  [...]

[Biologie Cellulaire] Contrôler la pureté des protéines

Un gel shift Je pensais que ça n'était utilisé que pour les interactions ADN-protéine, puisque c'est la sonde ADN marquée qu'on visaualise.  [...] Cependant il est écrit que les auteurs ont produits les protéines. C'est bien que l'on ne parle pas de protéines endogènes. D'où l'intérêt de produire ça dans un lysat de réticulocytes et de faire un gel shift pour tester la capacité des prot à interagir (puisque c'est sur ce point que la demande insistait).  [...]

[Biochimie] Différence entre puce à ADN et sonde à ADN !

Quelle est la différence entre une puce à ADN et sonde à ADN.  [...] Re. Différence entre puce à ADN et sonde à ADN.  [...]