• Santé - Sonde, ADN, Chromosome

[Biologie Moléculaire] hybridation moléculaire

Il faudrait que tu donnes les informations, sinon il va être difficile de t'aider. Qui plus est, la question serait sans doute mieux en chimie.   [...] ou chromosome) dans le génome des souches d'une bacterie enterique l'ADN des souches a été digéré avec l'enzyme I-CeuI, et une électrophorèse en champ pulsé a été lieu(figure A) ensuite une hybridation avec une sonde marquée spécifique du gène bal1(figure B ) et une sonde du gène de l'ARN ribosomal 16S (figure C).  [...]

[Génétique] CGH array

en fait, je sais qu'il y a de nombreux puits dans lesquels on met des fragment génomique humains ''normal'',et celui du patient. et cela est repartis ds l'ordre de chromosome. cela veut dire que dans le premier puit nous avons par exemple les sonde d'ADN normal du chromosome 1, que l'on va mettre en contact avec tous les chromosomes du patients surement pas.  [...] ..donc voila, si quelqu'un aurait la gentillesse de m'expliquer cette technique, j'en lui serai très très reconnaissante, surtout que j'ai rien trouve dans les bouquins et encore moins sur le net ou je me suis encore plus embrouillée.   [...]

[Microbiologie] Hybridation

Coucou tous le monde, au fait je vais faire de l'hybridation avec une sonde 16s et une sonde d'un gene de résistance,pour voir si le gene est chromosomique ou non, (puisque le 16s est du chromosome),pour la digestion donc j'ai utilisé l'enzyme. Iceu-1 (qui coupe l'adn) mais lors de la migration.  [...] Après, si l'expérience est un Southern-Blot (ou équivalent), la fréquence de coupure de l'ADN par l'enzyme doit être assez élevé pour que le profil de digestion soit lisse. Dans mon ancien labo, on utilisait des enzymes classique de type EcoRV, HindIII... Le point difficile étant que la zone de référence (pour toi le 16s) et la zone à tester (le gène de résistance) doivent toujours être détecté (et donc qu'il ne faut pas couper au niveau de la sonde - qui n'est généralement pas excessivement grande -500pb pour moi).  [...]

Polymerase Chain Reaction

L'objectif d'une PCR est d'augmenter la quantité d'ADN pour la rendre plus facilement détectable expérimentalement. Pour ce qui est de la méthode. les brins d'ADN sont chauffé a 95°C, a cette température ils se dénaturent, on se retrouve donc avec deux brins monocaténaires.  [...] Non le FISH et la PCR sont deux techniques très différentes et n'ont pas les mêmes objectifs mais utilisent tout les deux une hybridation. La PCR a pour but d'amplifier la quantité d'ADN pour le quantifier par exemple. Le FISH consiste a hybrider une sonde fluorescente complémentaire d'une séquence particulière dans le but de détecter des anomalies chromosomiques, par exemple si tu ne détectes un signal fluorescent que sur un chromosome pour la séquence qui t'intéresse dans un organisme diploïde cela signifie que la séquence a subit une délétion sur l'autre chromosome. Cela permet donc de faire des diagnostiques.  [...]

Sequence 5' pour un ADNc en Southern Blot

Voici ma question. Compte tenu du fait que l'ADNc ne contient que des exons comment se fait il que la sonde extremité 5' detecte quelque chose car il me semble que dans L'ARN mature ( qui permet d'obtenir l'adn c par RTPCR ), la sequence 5' n'est pas transcrite.  [...] salut, je ne suis pas sure mais le probleme me parrait beaucoup plus simple que ca. quoique c'est pas trés clair..quand tu dit une sonde 5'.qui s'hybride avec l'extrémité 5' de l'adn c ou g...ou bien tu parle de sonde marqué à son extrémité 5'...parceque si c'est le cas ca change tout.  [...]

[Biologie Moléculaire] Marquage directe et indirecte d'une sonde ADN

[Biologie Moléculaire] Marquage directe et indirecte d'une sonde ADN.  [...] Ma question est a propos du marquage directe et indirecte dune sonde ADN. Le prof nous a dit que le marquage indirecte est utilise pour amplifer le signal mais je n'ai pas compri pourquoi une necessité d'amplifier le signal.  [...]

gel shift : hhhheeeeelllp !!!!!!!

je suis en thèse et je travaille sur une proteine dont on voudrait confirmer l'interaction avec un promoteur d'un géne... je dois faire du gel shift mais dans mon labo on ne peut pas utiliser de radioactivité... j'ai vu qu'il existe des kits qui ne necessitent pas de radioactivité, il y en a même un ou il n'y a meme pas besoin de marquer la sonde d'ADN, il suffit de colorer le gel apres migration avec du SYbr green et du Sypro, cela a l'air tres pratique.  [...] g qd même encore une petite question...je sais qu'il faut faire des expériences de compétition sonde chaude/sonde froide pour tester la spécificité de l'interaction ADN/prot... s'il y a des aspécificités, est-ce dû au marquage de la sonde.  [...]

[Biologie Cellulaire] Exercices important!!

ce fragement est utilisé comme sonde ds une expérience de southern blot sur l'ADN génomique totale a partir duquel cette sonde avait été générée.  [...] question. sachant que vous souhaitez obtenir 80 colonies par boite, expliquez comment vous réaliser cette expérience (protocole de dilution utilisé, volume déposé sur la boite de petripour l'étalement).   [...]

[Biologie Moléculaire] Southern blot !!!

L'ADN de sperme de saumon permet, pendant le southern blot (et d'autres techniques comme le gel shift (EMSA)), d'empêcher les interactions non spécifiques avec la sonde (un peu comme la BSA ou le lait dans les western blot ou en immunohistochimie).  [...] Mais si la sonde, qui est en quantité saturante je crois, rencontre un ADN de saumon à peu près complémentaire, pourquoi irait-elle voir ailleurs s'il n'y a pas un ADN qui lui correspond mieux.  [...]

[Biologie Moléculaire] Ribosonde

Pouvez vous m'expliquer simplement la façon dont on crée une ribosonde Je ne comprends pas en effet ce que contient le vecteur au départ (de l'ARN ou de l'ADN), pourquoi on l'appelle ribosonde et pas sonde tout court. D'ailleurs, c'est de l'ARN la ribosonde Bref, merci beaucoup d'avance.  [...] Ne pas oublier que la réaction de transcription ne synthétise qu'à partir d'un seul des deux brins de l'ADN. Ne pas se tromper de brin si l'on veux utiliser cette sonde pour un Northern blot.  [...]