• Santé - Solution, Bactéries, Plasmide

Extraction du plasmide

la solution de lyse (comme son nom l'indique) va détruire les bactéries afin que les plasmides se retrouvent dans ta solution et non pas inaccessibles, protégées dans les bactéries.  [...] la solution de neutralisation neutralise l'effet de la solution de lyse une fois que tes bactéries sont lysées car a long terme ça peut être néfaste pour ton plasmide, et il me semble (mais je ne suis plus sur) que dans ce kit la neutralisation entraîne aussi la coagulation des débris bactériens qui apparaissent sous forme de nuage blanc dans ton tube afin de pouvoir mieux les éliminer par centrifugation.  [...]

Precipitation adn plasmidique

Bonjour, après une extraction d'adn plasmidique avec un kit qiagen, je me retrouve avec de faibles concentrations de plasmide. Je souhaterais donc le concentrer un peu afin de pouvoir par la suite le sequencer.  [...] Autre solution tu rajoute a ta culture sur la nuit un peu de chloramphenicol pendant quelques heures. Ca bloque la multiplication des bacteries mais n'affecte pas pas la replication de l'ADN. donc tu augmente la quantité de plasmide dans tes bacteries.  [...]

Extraction d'acides nucléiques

J'aurais voulu connaître succinctement les principes généraux (et pas les protocoles..) des méthodes d'extraction de l'ADN plasmidique, ADN totaux, ADN chromosomique, ARN. Parmis les ARN peut on séparer les ARNr, ARNt et ARNm.  [...] Sinon a partir de la solution (extraction à partir de cellule de mammifere, levures etc..) de départ tu transformes des bacteries pour isoler le plasmide.  [...]

Des OGM maison ?

Avec l'évolution des différentes méthodes d'extraction de l'ADN et de manipulation génétique, je me demandais, au delà de toute considération éthique, s'il était aujourd'hui envisageable de modifier génétiquement des organismes simples (du genre e. coli) en leur injectant des gènes déjà connus et séquencés, dont la fonction est bien identifiée, le tout avec un faible budget (quelques centaines d'euros tout au plus) et du matériel de laboratoire de base.   [...] la deuxieme méthode necessitera un peu plus de matériel et connaissance, mais au final, c'est plus ou moins juste un choc electrique sur des bactéries en solution avec le plasmide à insérer.  [...]

[Microbiologie] Culture bactérienne troublante

Avec le plasmide controle, la culture pr ésentait un aspect habituel avec une solution LB trouble assez homogène. En revanche la culture avec le plasmide d'intérêt pr ésentait de gros agglutinement de bactéries au fond de la bouteille en plus du LB trouble.  [...] ce peut il alors qu'en changeant de plasmide le résultat change et par conséquent si l'on effectue la transfection sur des bactéries des plasmides différents ayant tous les meme gene d'interret ( dans des expériences séparées sur la meme souche de bactérie) des résultats différents.  [...]

[Microbiologie] bacterie resistantes

je dois cultiver des bactéries possédant un plasmide de résistance à un antibiotique. Dans le bouillon, je dois mettre cet antibiotique. Je ne comprends pas pourquoi puisque les bactéries sont résistantes Pouvez m'éclairer.  [...] - Au cours des divisions cellulaires, le plasmide peut ne pas être transmis à certaines bactéries filles, il y aura donc apparition de bactéries non résistantes.  [...]

[Microbiologie] Correction Dilution en cascade (solution plasmidique)

On prend 10µL de cette solution soit 10*5 = 50ng de plasmide que l'on ajoute à 10µL d'eau, la nouvelle solution a une concentration de 2.5ng/µL ect...(Est-ce que j'ai bien expliqué le principe En fait je viens de me rendre compte en écrivant que je confondais les 50ng/µL avec les 50ng dans 20µL ce qui n'est pas du tout la même chose.  [...] En fait je me suis trompé au départ ce n'est pas une solution de 200ng/µL mais une solution contenant 200ng de plasmide. Pourquoi d'ailleurs partons nous de cette solution et pas directement de la solution contenant 100ng de plasmide (ce qui reviendrait à mélanger 2µL de la solution de départ avec 18µL d'eau).  [...]

[Biotechnologie] Méthode de purification de l'insuline recombinante

Je vous explique vite fait le contexte, le gène de l'insuline humaine est placé dans un plasmide, ce plasmide dans la bactérie et après sélection de la bonne colonie de bactérie on place la solution bactérienne dans un fermentateur pour obtenir beaucoup d'insuline, etc.  [...] Je sais qu'il y a beaucoup de méthodes de purification mais je ne sais pas laquelle est la plus adapté pour purifier l'insuline une fois que l'on a obtenu l'extrait protéique (insuline + toutes les autres protéines synthétisées par la bactérie).  [...]

[Biologie Moléculaire] Le plasmide a t'il l'insert?

Donc vérifier que tes bactéries sans plasmide sont bien sensibles aux deux antibios, et d'abord faire pousser les bactéries transformées sur strept, puis repiquer les colonies en les identifiant sur ampicilline, puis tester par miniprep celles qui ne poussent pas sur ampicilline.  [...] Pourquoi ne pas faire une ou plusieurs mini prép d'ADN (en priquant une ou plusieurs colonies) et simplement faire une digestion suivie d'une migration sur gel d'agarose et voir si on insert est présent. Si oui repartir des bactéries qui ont intégré le bon plasmide avec insert et faire une maxi.  [...]

[Biologie Moléculaire] Selection de bactéries par Antibiotiques lors du clonage d'ADN

J'ai aussi compris que la sélection à la base de l'ampicillin va nous permettre de distinguer entre bactéries qui n'ont rien incorporé et bactéries qui ont incorporé un plasmide et la tetracycline va nous permettre de distinguer entre plasmide recombiné et non recombiné.  [...] *Bref, le contexte est le suivant. on veut cloner un gène de l'ADN humain, pour ceci on utilise les plasmides des bactéries d'E.Coli qui contiennent entre autres des gènes de résistance à la tetracycline et l'ampicilline, grâce aux enzymes de restriction on peut incorporer le gène humain qu'on veut cloner dans le plasmide à un emplacement entre les séquences du gène qui code pour la résistance à la tetracycline.  [...]