• Santé - Sodium, Extraction, ADN

[Biotechnologie] Souches d'expression et préparation de plasmides

... F' chez E. coli JM109 va servir pour la préparation d'ADN simple brin dans le cas des constructions de banque... ou bien pour le sous clonage.  [...] 2* L'extraction d'ADN plasmidique consiste à effectuer la lyse des cellules au moyen d'un détergent (dodécyl sulfate de sodium) en présence de soude, à pH 13. A ce pH très alcalin, l'ADN est dénaturé, c'est-à-dire que les deux brins de la double-hélice sont séparés.  [...]

extraction d'Adn

Je connais l'acétate de sodium pour l'extraction d'ADN. Probablement que cela à la même effet.  [...] L'acétate de sodium permet de tamponner la solution, neutraliser les phosphates et cela aide également à la précipitation de l'ADN (en ajoutant un alcool comme l'isopropanol).  [...]

Na-bisulfite (NAHSO3) , rôle ???

Merci beaucoup pour votre réponse rapide... En effet, c'était bien pour l'extraction et la purification de proteines et non de l'ADN, désolé pour l'erreur.  [...] J'ignore le rôle du bisulfite de sodium dans le cadre d'un tampon d'extraction. Je voulais juste signaler qu'il pouvait aussi être utilisé pour une mutagenèse. d'où l'intérêt de remplacer C par U pour introduire des mutations ponctulelles.  [...]

[Biologie Cellulaire] etude du niveau de phosphorylation d'une protéine en WB

Pour l'extraction, si tu veux conserver les phosphorylations de ta protéine, il faut de l'orthovanadate de sodium (inhibiteur de phosphatase) dans le tampon et éventuellement d'autres inhibiteurs. Mais surtout garder les échantillons dans la glace le plus possible une fois l'extraction faite, cela limite d'autant plus les déphosphorylations.  [...] je vais essayer une technique d'extraction avec des inhibiteurs, j'ai trouvé un protocole qui me semble adapté, et j'effectuerai un dosage avant de déposer.  [...]

[Biologie Cellulaire] Problématique de TP

. broyé de l'oignon dans 9g de chlorure de sodium et 2 gouttes d'acide acétique (phase d'extraction).  [...] J'ai aussi un peu de mal à voir une problématique se dessiner sur une seule manip'. Il n'y a pas de question posée. Ce que vous souhaitez c'est simplement extraire de l'ADN. Ce n'est pas une question, c'est un objectif.  [...]

[Biochimie] Extraction enzymes

Pour réaliser l'extraction des enzymes de l'orge, j'ai procédé à un broyage de grains d'orge avec de l'eau distillée puis à une filtration et enfin une centrifugation pour récuperer les enzymes.  [...] Cependant, si ton enzyme est robuste, il n'est pas étonnant qu'une extraction à l'eau t'es permis de mesurer tout de même une activité.  [...]

[Biochimie] ADN ? un acide, oui mais pourquoi ?

Je lis partout La troisième fonction acide du phosphate reste libre et confère donc les propriétés acide aux acides nucléiques. Mais cette troisième fonction soit disant acide est sous la forme [O-] et non [OH], donc elle est basique.   [...] Après, si l'on voulait etre rigoureux d'un point de vue chimique, il faudrait dire que dans la cellule on ne trouve pas d'adn mais des sels d'adn (en pécisant bien entendu les très nombreux contre-ions possibles). Watson et crick n'ont, par exemple, pas identifier la structure de l'adn mais bien celle du sel de sodium de l'adn.  [...]

[Génétique] Electrophorèse d'un plasmide avec 5 bandes

Je suis étudiant et j'ai un problème pour l'interprétation d'un gel, en effet après extraction d'un plasmide, j'obtiens non pas les trois bandes attendus (super enroulées, linéaire, et circulaire), mais cinq bandes, après recherche j'ai trouvé qu'il peut y avoir deux explications.  [...] Je ne comprends pas ta question, peut-être faute de café mais. tu centifugies tout ton tube avec l'intégralité de son contenu = différentes espèces d'ADN, donc l'ADN précipite au fond et tu n'enlèves que le surnageant, le culot étant à la fin resuspendu dans du TE ou dans de l'eau.  [...]

[Biologie Moléculaire] Southern, Northern blot

Seconde différence. Concernant le dénaturant utilisé ==. Formaldéhyde pour ARN donc Northern. Hydroxyde de Sodium pour ADN, donc Southern.  [...] Concernant les marqueurs de taille, la référence est sûrement différente, puisqu'on s'attaque à deux composés différents. Acide désoxyribonucléique. Acide ribonucléique. (L'un étant double-brin, l'autre simple brin.).   [...]

[Divers] Aide pour animer un cours à des CM2?!!

Bof. Extraire son ADN est bien dangereux pour une classe de CM2. éthanol (inflammable et quand même toxique à respirer pour des enfants), hydrogénocarbonate de sodium (corrosif).  [...] Ce ne sont que des CM2, la chimie telle quelle ça va les faire suer plus qu'autre chose. A cette âge-là, il faut que ça bouge tout de suite, pas qu'on leur explique que l'ADN contient leur génome qui sert à ci ou ça et qu'on l'extrait par déprotéinisation, puis chélatation de l'ADN en réaction acido-basique.  [...]