• Santé - Sites, Restriction, Aval

[Biotechnologie] Expression d'une protéine

La séquence du gène comporte en 5' un site BamH1, et c'est le seul site du gène. Je voudrais insérer ce gène dans le vecteur d'expression mais je dois créer des sites de restriction en amont et aval du gène et je ne sais pas comment faire. En fait, si j'isole mon gène depuis la bactérie, je me retrouve avec 617 pb, comment puis-je ajouter des nucléotide amont et aval pour créer des sites de restriction (mutation par PCR) sur ces sites.  [...] Il suffit de rajouter les sites de restriction avant l'ATG sur le primer forward, et après le STOP sur le primer reverse, en prenant soin de rajouter quelques nucléotides (j'en met 5 perso) de part et d'autre pour faciliter l'assise des ER.  [...]

[Biochimie] nucléase

Si tu coupes avec deux enzymes différentes, les extrémités générées ne seront pas complémentaires l'une à l'autre puisque les enzymes vont couper différemment (le site de restriction n'est pas le même et le type de coupure non plus).  [...] Tu vas donc ajouter, par PCR et grâce à la séquence de tes amorces, des nucléotides en amont et en aval de ton gène. en amont, les nucléotides qui correspondent au site de restriction de l'enzyme 1, en aval, les nucléotides qui correspondent au site de restriction de l'enzyme 2.  [...]

[Biologie Moléculaire] comment faire une mutation par PCR?

Ensuite, il faut refaire une pcr en utilisant le résultat des deux pcr précédentes comme template et les amorces non mutées qui encadrent donc la région mutée et qui comprennent les deux sites de restriction. alors la c'est definitif je suis dans le champs, je vais attendre que l'image soit validee pour voir si ca m'eclaire.  [...] J'ai lu que si je veux muter un codon, je dois faire des primers avec 21 nucleotides en amont er 21 en aval de mon codon mute pour etre sur que le primer puisse se fixer. Alors je ne comprends pas comment les segments qui contiennent le site de restriction peuvent se terminer par la codon mute vu que le codon est entre 21 nucleotides de part et d'autre.  [...]

[Biochimie] Petite interrogation sur les enzymes de restrictions

Note. les enzymes de restriction sont excessivement nombreuses et, bien que je ne connaisse par leur utilisation lors d'une PCR (plutôt sur les étapes amont/aval, non ), je ne pense pas qu'on en utilise 36 pour une même manip.  [...] Vous etes sur qu'il ne s'agit pas d'enzymes de restriction Ca collerait plus a l'interrogation initiale de Valentino6 puisque en effet, la police peut étudier l'ADN en analysant les polymorphisme de restriction (RFLP) qui justement peut faire invervenir un grand nombre d'enzymes différentes.  [...]

sensibilité de OriC à la méthylation pour l'opéron tryptophane

Le mode d'action de la protéine Seq A est donc de séquestrer directement OriC dans la membrane, l'empéchant ainsi d'être en contact avec DnaA-ATP qui aurait permis une initiation de la réplication...c'est bien ça.   [...] Puis, c'est le complexe MutS+ATP – ADN - MutL qui permet le recrutement de l'endonucléase MutH. Il y a formation d'une sorte de boucle qui rapproche les 2 sites GATC non méthylés situés en amont et en aval du mésappariement.  [...]

Clonage orienté

Si c'est bien le cas, cela signifie que tu ne peux pas utiliser SacII pour le clonage. En effet, le clonage va consister à amplifier ton insert avec des oligos de PCR portant des sites de digestion aux enzyme de restriction voulues. On ne veut donc pas que la digestion en question coupe ton insert en deux.  [...] Après PCR, il faut digérer l'insert d'une part, et le plasmide d'autre part. Ces digestions vont permettent de générer des bouts cohésifs entre l'insert et le plasmide. Il suffit alors de choisir deux enzymes de restriction (peu importe lesquelles a priori).  [...]

[Biologie Moléculaire] Question teste de paternité pour exposé universitaire

Je suis à la recherche de petite information sur les testes de paternité, car sur le net il n'y a que les questions familiale mais peut de réponse théorique.   [...] Maintenant on teste le nombre de répétition en tandem par PCR. Les sites polymorphes d'intérêt sont déjà connus (puisque l'ADN humain est séquencé), donc il suffit de designer des primers en amont et en aval de ces répétitions et de regarder la taille du fragment amplifié.  [...]

L'INRA au secours du peuplier noir sauvage de la Loire

D'une part, les chercheurs de l'INRA ont établi une collection de 350 peupliers noirs représentatifs de la diversité française. Cette collection ex situ est gérée par la pépinière forestière de l'Etat du Ministère de l' Agriculture située à Guéméné-Penfao (Loire-Atlantique).  [...] Une étude couplant inventaire, étude de diversité génétique et actions de communication concerne actuellement l'ensemble du lit mineur de la Loire. Treize sites sont particulièrement étudiés, comme la réserve naturelle de St Mesmin (en aval d'Orléans), récemment référencée 'ISS' (Site d'étude prioritaire) du réseau d'excellence européen Evoltree.  [...]

[Génétique] Mécanisme de transcription

Si on est d'accord sur cette définition, alors on peut effectivement parler d'un promoteur en amont (avant) le site d'initiation de la transcription (symbolisé par la séquence AUG). Le consenscus dans la communauté scientifique quand il est question de l'ADN c'est de parlé de 5'-3'.  [...] Je peux pas faire de dessin, mais imagine une schématisation de l'ADN (2 lignes horizontales paralléles), mets au 2ème quart une marque +1, qui est le site d'initiation de la transcription. En amont de ce +1, donc avant, soit sur le gauche, tu peux poser une position que tu note -10 et plus à gauche encore une position -35, ce qui correspond aux boites (ou unités de transcription) qu'on retrouve chez les procaryotes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Epissage alternatif et codon start

De même, il me semble que ce n'est pas toujours le 1er ATG qui correspond au +1. De mé moire, un prof m'avait dit qu'il existait une protéine dont la traduction commencait a partir du 12eme ATG.   [...] Non il ne le fera pas, mais pas pour les raisons indiquées. Dans le cas que tu donnes le codon stop est considéré comme precoce, puisqu'il se trouve en 5' d'un jonction exon-exon. Dans ce cas la l'ARNm est dégradé par la voi NMD (non sense mediated decay), qui en plus inhibe la traduction.   [...]