• Santé - Sites, Amorces, ADN

[Biologie Moléculaire] quantitative/real time PCR quelle différence?

La PCR compétitive est basée sur la co-amplification de la matrice d'ADN cible et d'une quantités données d'un ADN standard interne (compétiteur ) portant les mêmes sites de fixation d'amorces.  [...] Alors que les systèmes de PCR en temps réel reposent sur la détection et la quantification d'un émetteur fluorescent pendant le processus d'amplification, et l'augmentation du signal d'émission fluorescente est directement proportionnelle à la quantité d'amplicons produites durant la réaction.   [...]

[Biologie Moléculaire] Aflp

ma question est.comment on peut faire une amplification selective des fragments de restrictionj'ai lue que la selection est faite parapport à une base mais jai pas bien compris.   [...] Je dirais. avec des amorces correspondant aux sites de restriction des enzymes utilisées pour découper l'ADN de départ.  [...]

Besoin que l'on eclaire ma lanterne en Génetique

La RAPD est une technique de PCR permettant d'obtenir une empreinte spécifique à partir d'un génome donné. On utilise pour cela des amorces ayant une faible spécificité (elle s'accrochent à de multiples endroits de l'ADN). Comme tous les génomes sont différents, les sites de fixation des amorces seront variables d'un individu à l'autre.  [...] Ensuite les aux extrémités des fragments d'ADN obtenus on fixe des séquences cibles. Il ne reste plus qu'à faire une PCR en utilisant des amorces complémentaires des séquences cible.  [...]

Projet clonage et expression d'un gène

Il faut ensuite commander/créer les bonnes amorces pour amplifier le fragments d'ADN désiré.  [...] Pour faciliter le clonage, il est possible d'ajouter à l'extrémité des amorces des sites de restriction (cohésifs, c'est mieux ). Une fois les amorces choisis et produites, la PCR peut se faire de deux manières. Soit sur colonie directement (prendre une colonie (ou moitié de)), puis amplifier directement l'ADN d'intéret (avec les bonnes température et temps d'élongation).  [...]

[Biologie Moléculaire] Comprendre les cartes des plasmides

Le promoteur est situé sur l'extrémité 5' du gène, en amont de la séquence à transcrire. C'est pour cela que quand tu vas couper et ajouter l'adn qui t'interesse tu vas avoir un sens A et B. Le sens a choisir est celui ou on va avoir l'extremité 5' du gène.  [...] La si tu veux retaper des sites de restriction, c'est trés utile et tu as également la Taq polymerase qui est une adn polymerase qui te sert a effectuer des PCR avec des amorces dans les deux cotés de chaque brin.  [...]

[Microbiologie] Gene

1) Cela veut dire que tu fais une PCR en utilisant l'ADN chromosomique de ta souche et des amorces qui reconnaissent deux sites spécifiques de ton gène X. A la fin de ta PCR tu fais migré le produit de ta PCR sur un gel d'agarose et si tu observe une bande (un amplicon, qui représente ton gène X ou une partie de celui-ci qui a été amplifié) cela veut dire que ton gène X est bien pr ésent dans ton ADN chromosomique.  [...] 2) Blaster un gène, cela veut dire comparer la séquence nucléotidique de ton gène aux séquences nucléotidique de gènes pr ésents dans une base de donnée. http.//blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast..._LOC=blasthome.   [...]

[Génétique] AFLP Amplified Fragment-Length Polymorphism

J'essaye de comprendre cette technique (AFLP) et d'après ce que j'ai lu. l'ADN génomique est digéré par deux enzymes. Des adaptateurs sont ajoutés aux extrémités des sites de restriction. Les amorces peuvent ensuite se fixer sur les fragments obtenus et ceux-ci sont amplifiés.  [...] La PCR peut être réalisée en plusieurs étapes. une première avec des amorces dont la séquence est identique à celle des adaptateurs et qui amplifie ainsi tous les fragments. la seconde avec des amorces possédant de 1 à 3 nucléotides supplémentaires en 3' sélectionnant ainsi un plus petit nombre de fragments étant donné que ceux ci peuvent être très nombreux.  [...]

[Biologie Moléculaire] choix des amorces

Je sais qu'aujourd'hui, des sites sur internet permettent de calculer de choisir les amorces les plus adaptées au brin d'ADN qu'on veut dupliquer. Mais j'aimerai connaitre le raisonnement qu'il faut adopter quand on veut prévoir la séquence des amorces sens et anti sens.  [...] en fait, je suis face à une séquence d'ADN, pour laquelle on me demande d'établir le profil des amorces que je peux utiliser sans pour autant me donner les enzymes de restriction qu'on peut utiliser.  [...]

[Biochimie] PCR: a quoi servent les differents elements

Enfin les amorces servent a amplifier un fragment d'ADN spécifique dû a la complémentarité de l'amorce sur une région de la matrice et sert à l'enzyme pour démarrer son activité de polymérization. Sans amorce l'enzyme ne sait pas démarrer une polymérization.  [...] La spécificité se fait sur 2 éléments, la complémentarité des amorces sur la séquence d'ADN, donc on aligne quelques centaines de séquences de différentes espèces pouvant être dans notre milieu et on choisit deux sites spécifiques de notre espèce d'intérêt.  [...]

PCR clonage

Tu as calculé comment ton Tm pour tes amorces avec sites de restriction Tu as peut être tout simplement un problème d'hybridation de tes amorces à cause d'un Tm inapproprié.  [...] mes amorces sont identiques, a part les sites de restcriction, c'est pr ca que les Tm sont élevé, mais est ce que je devais reduire de mes amorces pr que j'aie une Tm convenable.  [...]