• Santé - Site, Restrictions, ADN, Enzymes

[Biologie Moléculaire] Mutagénèse dirigée qui ne fonctionne pas

3) Si mes primers les plus extrèmes contenant les sites de restriction uniques du plasmide ont leur séquence commençant directement par ces sites de restriction uniques, y a t-il trop de risques qu'ils soient modifiés (et donc que je perde mes sites de restriction) par une enzyme qui perdrait de sa fidélité justement là où je veux pas.  [...] La plus part des enzymes de restrictions ont besoin de quelques bases de part et d'autre du site pour se fixer a l'ADN si ton site est exactement a l'extremité de l'ADN beaucoup d'enzyme ne couperont pas du tout. ca va etre super galere.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage par PCR taille des amorces

[Biologie Moléculaire] Clonage par PCR taille des amorces.   [...] En revanche on conseille de rajouter quelques bases entre le le site et l'extrémité 5' de façon à internaliser le site car les enzymes de restrictions sont des ENDOnucléases, il faut que leur cible soit au milieu.  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide

Je dispose de deux enzymes de restrictions, une XhoI qui possède deux site de restriction dans la cassette de polyclonage. l'autre enzyme est MluI cependant sur le schema du plasmide je n'ai pas son site de restriction donc je ne sais pas ou elle coupe.  [...] oui tu peux, sous certaines conditions. Il faut un site de restriction dans le vecteur, et un autre dans l'insert (pas au milieu de l'insert). Selon que l'insert est dans un sens ou dans l'autre, tu auras deux fragments différents en taille. Pour l'histoire du plasmide natif j'aurais dit que c'etait le vecteur seul.  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

Pour définir les sites de restriction que tu utiliseras en 5' et en 3', regardes lesquels ne sont pas présents dans ton ARNm et prend les. Cela t'évitera de cliver ton ARNm par ces enzymes de restriction, mais surtout de cliver spécifiquement les sites que tu as ajouté de part et d'autre de l'ARNm.  [...] vous pouvez utilisez 2 enzymes de restrictions aussi..mais cette fois vous allez remplacer une séquence du vecteur (elle va être coupée par 2 enzymes différents, chaqu'un d'un coté )par votre séquence d'ADN (qui va être aussi coupée par lé deux)...P.  [...]

[Biologie Moléculaire] Rflp

Pour la technique RFLP, tu utilise des enzymes de restrictions,ça marche dans le cas ou tu as des rflp,c'est à dire des SNP(single nucleotide polymorphism) qui sont dans un site de restriction.ainsi, selon l'allèle, l'enzime clivera ou pas son site, ce que l'on observe par migration sur gel.  [...] D'accord merci donc si je comprend bien la technique du southern blot ne demande pas forcément de cliver les brins par une enzyme de restriction. La sonde peut hybrider directement les brins d'adn dans ce cas.  [...]

[Microbiologie] Taille de plasmide

j-ai les enzyme de restriction BamHI,EcoRI et PstI,COMMENT SAVOIR ESQ CES ENZYMES ONT DES SITES DE RESTRICTIONS POUR LE PLASMIDE pGEM-T ET SI C-EST OUI COMBIEN DE SITE SVP DES REPENCES SONT LES BIENVENUE.  [...] C'est facile pGEM-T est un vecteur de sous-clonage commercial. La carte plasmidique est disponible sur internet. A partir de là un enfant de 6 ans trouverai le nombre de site de restriction pour ces 3 enzymes.  [...]

[génétique] L'empreinte génétique et le test de paternité

Ca ne veut pas dire pour autant qu'ils ont le même code génétique, car l'empreinte génétique compare seulement certains endroits précis du génome (au moyen d'enzymes de restrictions qui coupent l'ADN à des endroits déterminés).  [...] On peut vérifier la paternité d'une personne, mais est-il possible de remonter plus loin vers des générations antérieures En Irlande 1994 une mère de 3 enfants s'était réincarnée à la recherche de ses enfants, abandonnés après sa mort à l'âge de 13 ans pour le plus grand.   [...]

[Biotechnologie] An efficient TALEN mutagenesis system in rice

L'ADN chromosomique (hors plasmides, etc.) provenants des individus/plants résistants à l'hygromycine est extrait avec une méthode/kit rapide spécifique pour plantes (ex. Tiangen TM concernant l'équipe qui publie). La même méthode de digestion par PCR / enzymes de restriction que pour les chloroplastes est appliquée pour scanner les lignées transgéniques (Fig.  [...] Je suppose que les séquences ciblées par les enzymes de restrictions participent du transgènes, auquel cas on digère la séquence ADN et on regarde ce que ça donne par PCR pour détecter les inserts.  [...]

[Biologie Moléculaire] Site de restriction

Ce n'est pas bien compliqué dans le principe, il s'agit simplement de designer, disons les 20 premières bases de votre séquence et de coller un site de restriction devant. Comme les enzymes de restrictions sont des endonucléases, il faudra aussi bien penser à mettre 6 bases en amont.  [...] Pour introduire des amorces avec des sites de restriction en phase il faut rajouter deux nucléotides avant le site BamHI et deux nucléotides après le site de SalI ça sera comme suit.  [...]

[Génétique] Construire un vecteur de transgenèse dérivé des transposons

Pour ce faire nous allons réaliser une PCR du gène Tet avec deux amorces contenant des sites de reconnaissances pour les enzymes de restriction XbaI et HindIII. Visiblement les amplicons obtenus possèdent à chaques extrémités le site de reconnaissance pour ces enzymes de restrictions et une Adénosine (d'ailleurs là j'ai pas compris d'où elle vient).  [...] 3-On introduit les enzymes de restrictions XbaI et HindIII. on va avoir le fragment Tet qu'on va ensuite insérer dans pBCKs+.  [...]