• Santé - Site, Lignée, Labo

[Biologie Moléculaire] culture cellulaire

Pour te donner un idée tu peux aller sur le site de American Type Culture Collection = ATCC. www.atcc.org (Je viens d'aller voir, le site est momentanément indisponible mais tu peux essayer plus tard). C'est le site d'une boite américaine qui possède notamment une banque de lignée cellulaire où bien souvent les labo commandent les lignées.  [...] Ils ont une sorte de fiche technique pour chaque lignée. Sur la page d'accueil il te suffit de cliquer sur le lien cell lignes and hybridomas (sur la gauche de la page). Ce lien va t'ouvrir une page ou une fenêtre (je ne me souviens plus très bien) dans laquelle tu vas pouvoir saisir le nom de la lignée qui t'intéresse.  [...]

[Biologie Cellulaire] Aide TPE vieillissement cellulaire

Les cellules HeLa n'ont rien d'exceptionnelle à part qu'elles forment une des premières lignées de cellules cancéreuses isolées à partir d'un cancer du col de l'utérus d'une pauvre dame. Cette lignée est une des plus utilisées en labo pour l'étude des cancers.  [...] Une cellules cancéreuses est en effet très exceptionnellement immortelle. En revanche la lignée de la quelle elle est issue est souvent immortelle. La confusion persiste car il y a souvent un abus de langage. Hela n'a rien de particulier c'est simplement la première lignée cellulaire humaine immortelle cultivée en labo.  [...]

[Biologie Cellulaire] Peut-on cultiver du cancer in vitro !

Il faudrait donc que la lignée cellulaire redevienne totipotente puis se différencie. Bref, qu'une cellule cancéreuse devienne un zygote.  [...] -S'il s'agit d'une lignée établie, les protocoles de culture (milieu, temps et ratios de passages etc...) peuvent être différents selon la lignée. Si tu veux des exemples va sur le site d'american type cell culture (un exemple en cliquant au hasard sur le site.  [...]

clonage insert

On dispose d'un ADNc de 2825pb obtenu à partir d'une lignée cellulaire humaine et cloné dans le vecteur lambda gt11 au site EcoR1, au sein de l'opéron lactose.  [...] L'insert fait 2825bp il est dans un vecteur. Tu dois trouve la carte de se vecteur si tu veux pouvoir avoir la taille quand on le linéarise.   [...]

Souris transgéniques - nomenclature

Sur le site du jax (the jackson laboratory), il y a toute une partie détaillée sur la nomenclature officielle des lignées de souris. Mais c'est un peu compliqué (et n'a pas vraiment d'intérêt, souvent il est plus rapide de lire la description d'une lignée que d'essayer de décripter la nomenclature brute).  [...] Dans le cas des DTA. il s'agit d'une toxine avec un stop floxé. Donc si tu croises les cd4-cre avec cette lignée, les cd4+ vont exprimer la cre, recombiner et exciser le stop =. la DTA s'exprime =. toutes les cd4+ meurent.  [...]

[Génétique] caryotype

On ne fait pas de caryotype sur des gonades car on n'a que la moitié du génome (au stade ovule et spermatozoide) et on a des phénomènes de crossing-over et autres participant à la diversité du génome. De plus, sur les gonades, tu n'auras jamais le meme génome.  [...] Alors, d'abord. Pour les granulocytes. Sur ce site, tu as leur nature (par rapport à leur lignée granuleuse, leur étapes de différenciation à partir d'une cellule souche quoi) avec les différents PN (polynucléaire).  [...]

[Biologie Cellulaire] Sélection de lignées stables

Mon labo a acheté une lignée stable Cas9 MDA-MB-231 (cancer du sein). Elle porte un gène de résistance à l'hygromycine. Dans ma data-sheet il est écrit que pour la sous-culture, il faut remplacer le milieu de sélection par du milieu sans antibiotiques pendant 6h.  [...] Ma question est la suivante. pourquoi devoir remplacer le milieu 6h avant de passer les cellules Est-ce que l'hygromycine a un effet sur la trypsine Ou alors est-ce que je ne dois faire ça que quand je veux ensemencer mes cellules pour une manip, et les passer normalement avec le milieu de sélection le reste du temps.   [...]

[Biologie Moléculaire] Transfection siRNA et plasmide

Actuellement, je bloque sur une manip de sous-expression de HSP par siRNA dans une lignée cancéreuse, car le TF a une demi-vie extrêmement courte. Il est stabilisé par culture en milieu hypoxique (nécessitant une chambre spéciale non dispo dans mon labo) ou par traitement par des agents chimiques.  [...] Par contre, vous supposez que HSP régule l'expression du TF au niveau post-traductionnel, bien entendu Dans ce cas là, pourquoi ne faites vous pas un marquage à la méthionine S35 puis immunoprécipitation anti-TF et regarder à plusieurs temps la quantité de radioactivité par autoradiographie Ainsi vous avez accès à la demi-vie de votre protéine, modulée ou pas par HSP, et dans ce cas, que la demi-vie soit courte ou pas, vous saurez forcément comment évolue l'expression de la protéine (au niveau post-traductionnel).   [...]

[Journal club] Extinction de l'expression de gènes par les siRNA : la découverte

Ils ont donc procédé à des co-transfections à la lipofectamine. pGL2/pRL ou pGL3/RL, avec les différents siRNA et ont regardé les activités luciférase 24 heures après transfection. Dans toutes les lignées cellulaires, on observe une extinction spécifique et efficace (sauf pour les HEK293) des gènes rapporteurs ciblés par leur siRNA respectif sans affecter l'activité des autres rapporteurs.  [...] Quand meme, je suis moyennement d'accord sur le fait qu'un siRNA est similaire a un KO. Pour avoir expérimenté cela au labo, il est clair qu'en expression transitoire le taux d'inhibition de la synthese protéique est loin d'etre maximale, et meme si on cree une lignée stable exprimant le siRNA on n'arrive pas non plus a 0.  [...]

proteine ou cellule stable ???

Pour les lignées cellulaire, je comprends un lignée stable comme une lignée exprimant stablement une protéine d'intérêt. Il faut mettre en opposition les lignées stables au lignées transitoires. Je m'explique, dans le cas d'expression hétérologue d'une protéine dans une cellule eucaryote on peut soit.  [...] et bien, une lignée immortalisée c'est une lignée qui ne rentre pas en phase Go ou sénescence, elle se multiplie sans arrêt, de façon anarchique, un peu comme une tumeur cancéreuse... c'est pour ça qu'on les utilise dans les labo... c'est facile.  [...]