• Santé - Site, Coupure, Restriction, Enzyme

Southern blot et séquençage - Interprétation

L'etude porte sur une portion du genome de deux enfants (individus 1 et 2) contenant un gene codant une enzyme importante dans le developpement musculaire. L'individu 1 presente un taux d'activite enzymatique normal. Pour l'individu 2 qui est malade, l'activite enzymatique est toujours tres faible.  [...] Un Southern blot a ete effectue sur le genome des deux individus en utilisant comme sonde le gene entier codant l'enzyme (prealablement rendu simple brin) (Figure 1 ci-dessus). Les genomes ont ete prealablement soumis a une digestion par l'enzyme Xho I.  [...]

[Biologie Moléculaire] Site de restriction

Chaque enzymes de restriction reconnaît une séquence d'ADN spécifique, il s'agit d'un site particulier qui sera clivé quand l'enzyme sera présente.  [...] Selon moi, la chose relève plutôt de l'endroit où se produit la coupure, pas des agents. Surtout, je ne vois pas comment un site de restriction sera présent sans que le site de coupure y soit (mutation ponctuelle exclue).  [...]

[Biologie Moléculaire] enzyme de restriction

J'ai un problème avec une digestion d'ADN amplifiés par PCR par l'enzyme de restriction Mnl1, une bande supplémentaire que je n'attendais pas apparaît, alors que ma PCR est spécifique et n'est pas contaminée. Mes réactifs de digestion non plus ne sont pas contaminés, j'ai vérifié avec le blanc de PCR.  [...] Il existe une site de restriction cryptique dans votre séquence. Il n'est pas absolument le site de restriction mais est pourtant reconnu par l'enzyme. Ce serait quand même étonnant que l'efficacité de coupure soit grande.  [...]

Adn

Le site de coupure de l,enzyme de restriction Hap II est.CCGG en position 1.  [...] Quels sont les doubles brins obtenus apres action d,un melange de ces 2 enzymes sur adn suivant dont 1 des 2 brins est.  [...]

[Biochimie] RFLP et application !

Je crois qu'on a utilisé une seule enzyme de restriction qui a un site de coupure dans la séquence.  [...] Le raisonnement est bon, ce qu'on voit est la sonde qui se fixe soit sur un morceau de 2 kb soit de 5 kb selon que le site de coupure est présent ou non.  [...]

[Biochimie] Dégradation tag et protéase

Que voulez faire exactement Si c'est pour éliminer le tag, plusieurs options existent déjà telles qu'intercaller un site de coupure pour une enzyme spécifique entre le tag et la protéine d'intérêt.  [...] Par exemple, dans la série des pGEX (plasmide GST), les plasmides pGEX T introduisent le site de coupure par la thrombine, les plasmides pGEX X introduisent le site de coupure par le facteur Xa et les plasmides pGEX P introduisent un site de coupure par la protéase presission (ca doit être une enzyme propriétaire ça).  [...]

[Biologie Moléculaire] pourquoi parle-t'on d'effet "star"

Alors je crois que c'est à cause des bandes que l'on obtient après coupure par l'enzyme de restriction qui donnent un effet similaire aux bandes obtenues sur le spectre d'une étoile (star)...mais bon je suis pas très sûre.  [...] Donc si j'ai bien compris le spectre de restriction d'une certaine étoile (de mer je suppose) donc un profil ressemblant au coupure aspécifique surement de l'enzyme de restriction avec laquel l'effet star é été observé en 1 er c'est bien sa.  [...]

Problème de digestion enzymatique

4- Vos recombinants sont issus de purif sur gel d'amplification PCR Beaucoup de possibilités. vous n'avez pas sélectionné la bonne bande sur gel, ou alors vous êtes planté dans les amorces de PCR, expliquant l'absence d'un site normal de restriction.  [...] Envoyez votre protocole en entier, détaillé, carte de restriction du fameux plasmide comprise, si vous le désirez, je verrai si je vois un truc qui saute aux yeux.  [...]

[Biologie Moléculaire] Sites de restrictions proches sur vecteur

Merci IngDr pour ce lien super. J'étais allé sur le site de NEB mais visiblement je n'avais pas assez fouillé...Je vois que les deux enzymes que je veux utiliser clivent à 97% un fragment où une seule base est présente après le site de restriction...donc j'ose espérer que sans base, il y aura suffisamment de coupure.  [...] Les enzymes de restrictions sont des endonucléases. Il faut donc nécessairement au moins une base avant le site de restriction. En principe c'est quand même bien d'avoir 5 ou 6 bases pour que l'enzyme puisse bien s'orienter sur le site de restriction. Cela dit le tableau de IngDr donne que la restriction est faisable dans tes conditions. Essaie.  [...]

biochimie

(Précision. une endonucléase de restriction est un enzyme qui opère une coupure spécifique sur le DNA double brin au niveau d'une séquence bien déterminée).  [...] C- Donner le profil électrophorétique qui serait obtenu si on fait agir une autre endonucléase de restriction pour laquelle chacune des molécules (A et B) possède deux sites de coupure distants de 4000 pb.  [...]