• Santé - Site, ADN, Clonage

[Biologie Moléculaire] Vecteurs navette

Vecteur de clonage. est un plasmide ayant une réplication autonome dans la cellule hôte et un site multiple de clonage afin de cloner un fragment d'ADN d'intérêt.  [...] Vecteur d'expression. Destiné à transférer un gène et le faire exprimer dans une cellule hôte qui n'est pas sa cellule d'origine.   [...]

exercice de génomique assez complexe..

Soit une séquence d'ADN (bicaténaire) constituée de TCTAGA, site de restriction reconnu par l' endonucléase de restriction XbaI.  [...] Quels seraient les sites de clonage susceptible d'insérer cette séquence d'ADN, parmi les site de clonages suivants, qu'on supposera présents chez un vecteur quelconque.  [...]

[bio mol] pUC et LacZ

on intègre un fragment d'adn dans ce plasmide pUC. ensuite on l'introduit dans une bactérie et l'importance des sites de réplication du pUC va permettre un clonage important du fragment d'adn souhaité.  [...] S'il n'y avait qu'un seul site de clonage, tu aurais une grosse contrainte sur ton ADN de départ et donc presque jamais la possibilité de le découper pour en isoler ton fragment d'intérêt (ou alors, tu aurais à l'amplifier avec de amorces portant le site de restrictions, ce qui est plus lent et peut génerer des erreurs).  [...]

[Biologie Moléculaire] Tp biomol

Ensuite au TP2 on a effectue un clonage moleculaire. Alors au depart on avait un vecteur compose de pBluescript digere par EcoRI et un melange avec pBluescript digere par ECORI pBR(eco4)(compose de pBR322 et 4 segments d'ADN de 300pb clones au site de restricition) digere aussi par ECORI.  [...] Ensuite on a integre le melange avec ligase et sans ligase dans les bacteries competentes preparees prealablement. on les met en culture sur X-gal et ampiciline. On observe des colonnies blanches et bleues donc en fait ca c'est pas rapport a l'insert, si il vient s'inserer au niveau du lacZ la B-gal nest pas fonctionnelle et du coup on a des colonnies blanches, au cas contraire elles sont blanches.   [...]

Technique ADN recombinant

1)Ce que je ne comprend pas c'est que une fois que l'adn à été intégré dans le site de clonage sur le plasmide il fait en sorte que la beta-galactosidase n'est pas produite par lacz du moins pas une beta-galactosidase fonctionnelle.  [...] 2) pour le puC19 qui contient un mcs (multiple cloning site) comment se fait-il que le mcs qui consiste donc en des séquences spécifique de nucléotides si j'ai bien compris ne perturbe pas la lacZ vu qu'il est en plein dans le gène si j'observe bien l'image suivante ( je joins l'image).  [...]

Structure d'un phage

Mais ou se trouve la fameux site cos qui rend possible l' empaquetage de l'ADN dans la capside et à quoi sert t il dans le clonage.  [...] Le phage possède bien un ADN double brin linéaire et ses extrémités sont les séquences COS (séquences cohésives d'ADN simple brin qui font 12 bases). L'ADN du phage peut donc se circulariser grâce aux COS. On peut empaqueter in vitro de l'ADN exogène dans l'ADN phagique tout en conservant les régions COS, le phage encapside par reconnaissance des régions COS puis après infection sur des bactéries l'ADN se re-circularise dans son cytoplasme.  [...]

Augmenter la capacité d'1 plasmide??

Ben, c est un cosmide je pense, dans mon cours on me dis qu on peut augmenter la capacité d un plasmide en faisant d abord un clonage avec un ADN genomique puis...puis je comprends plus rien. c est pour augmenter la quantite d ADN a incorporer...plus on met des sites cos plus on peut y inserer des choses.  [...] .c est avec un phage lamba je pense...on dis qu on peut supprimer des choses pas interressante hors du cosmide formé, mais une fois qu on a des site de clonage et des sites cos, c est bon, non je vois pas trop de dif avec le clonage en fait.  [...]

[Biologie Moléculaire] Sites de restrictions proches sur vecteur

Je dois cloner un cDNA dans un vecteur pET-15b (cf pièce jointe). J'ai choisi de faire un clonage orienté, ne pouvant pas utiliser NdeI qui clive mon cDNA, j'ai choisi XhoI et BamHI. Mais comme vous le voyez sur la carte du plasmide, ces deux sites sont accolés de telle façon que lorsque XhoI clive sa séquence (C/TCGAG), celle de BamHI (G/GATCC) se trouve à l'extrémité de l'ADN, avec même pas une base avant son site.  [...] Dans ce cas, ne fait pas un clonage orienté, utilise juste BamHI, et tu fais un screnning après pour vérifier l'orientation par digestion. Tu es sensé avoir 50% des clones positifs dans le bon sens.  [...]

Le buzz du clonage d'un Néandertalien était un bug

La petite annonce n'est pas parue sur le site de la Harvard Medical School, où travaille pourtant le généticien George Church, qui en aurait eu l'idée. C'est le Daily Mail qui a titré ainsi un article où est exposée son idée de créer un ADN d' Homme de Néandertal et de l'utiliser pour une expérience de clonage qui irait jusqu'à la naissance d'un bébé néandertalien.  [...] Et puis, il y a eu le mammouth. En septembre 2012, l'université fédérale de Yakoutie (Russie) annonçait le prochain clonage d'un mammouth, dont le développement serait assuré par une éléphante jouant la mère porteuse. Déjà, la nouvelle diffusée en langue anglaise s'appuyait sur une erreur de traduction.  [...]

clonage/enzyme en dehors du site multiple de clonage

Mon encadrant m'a donc dit de refaire une digestion contrôle en prenant une enzyme en dehors du site de clonage multiple (MCS) mais je ne vois pas à quoi cela va servrir.  [...] Ou peut-être ta digestion n'a tout simplement pas fonctionné (problème de compatibilité enzymes/buffer, trop petit volume + évaporation, stock d'enzyme foutu si resté à température ambiante, etc).   [...]