• Santé - Signal, Hybridation, Cellules

biologie moléculaire

connaisons que toutes les cellules d'un meme animal contiennent des génomes identiques, dans une expérience, un tissu composé de multiples types cellulaires est fixé et soumis à une hybridation avec une sonde d'ADN spécifique d'un géne particulier. à votre grande surprise, le signal d'hybridation est brin plus fort dans certaines cellules que dans autre, est ce quelqu'un peut me donner une explication détaillée.  [...] si ta sonde n'hybride que les ADN, ca pourrait représenter la différence d'accessibilité des gènes spottés, dans les cellules ou le signal est le plus fort on aurait un gène plus accessible qui suppose une plus forte expression.  [...]

[Biochimie] Hybridation dans southern blot

j'ai un travail a faire sur le southern et il y une question dont je ne saisis pas le sens. Qu est ce qui confere et/ou renforce la spécificité d'un signal d'hybridation.  [...] Si tu as spécifié sonde/cible. après lavage pour éliminer ton excès de sonde tu as un signal d'hybridation puisque tu as eu fixation de ta sonde sur ta région cible.  [...]

[Biologie Moléculaire] intensification du signal en hybridation in situ

[Biologie Moléculaire] intensification du signal en hybridation in situ.  [...] J'ai certaines sondes en S35 très pâle en hybridation (ARN-ARN) et j'aimerais intensifié le signal. Avez-vous des trucs.  [...]

[Microbiologie] le faible signal d'hybridation !!!! urgent

[Microbiologie] le faible signal d'hybridation... urgent.  [...] svp le faible signal d'hybridation moléculaire de quelque souches est du a quoi pratiquement.  [...]

[Biologie Moléculaire] Hybridation ADNc / ADNg : besoin de confirmer !

Jusque là tout vas bien. sur notre ADNg. on a bien deux sites de restrictions adjacents HindIII qui donnent un fragment de 0,3Kb et qui hybrident avec ma sonde H.   [...] D'après moi, cette expérience confirme mon hypothèse de présence d'un intron de 0,8Kb sur le fragment d'ADNg de 1,8Kb NcoI/NcoI. En effet, si on obtient deux bandes radioactives, c'est que notre fragment de 1,8Kb est coupé en deux par l'enzyme HindIII & la sonde N hybride avec ces deux fragments.   [...]

selection de cellules par la technique de l'hybridation in situ

Je ne comprends pas tres bien la technique d'hybridation in situ, pour observer si un mRNA particulier est exprimé au sein d'un tissu ou d'une cellule, il faut bien faire éclater les cellules. Et parfois on nous dit que ça nous permet de voir quelles cellules ont intégré un transgène par exemple et de les sélectionner.  [...] L'hybridation in situ se fait effectivement sur des cellules mortes, sur lame, car il faut perméabiliser la membrane pour pouvoir faire rentrer les sondes... Les sondes sont des ARN complémentaires de ton ARN cible, couplées à un fluorophore par exemple, ou alors c'est des sondes chaudes (radioactives).  [...]

Sensibilité et hypersensibilité à la Dnase I

Salut à tous. Je voulais savoir qu'elle est la différence entre la sensibilité et l'hypersensibilité à la DNase I. Je sais que c'est en rapport avec la structure de la chromatine et l'accessibilité de facteurs de transcription à certaines régions de l'ADN mais je n'arrive pas a voir la différence entre les deux. Merci.   [...] n'obtient pas de signal. Si l'hybridation est réalisée avec un ADNc non.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification PCR

Vraiment, je ne comprend pas comment cela est possible d'obtenir un amplicon à la taille attendu (avec un signal légèrement plus faible que les témoins positif) en ayant aucune hybridation possible in silico.  [...] Au contraire, le séquençage te donne une information précise sur ce qui s'est déroulé pendant ta PCR. Tu pourras connaitre le pourcentage d'homologie entre l'amplicon du témoin négatif et ton gène d'intérêt ou du moins savoir à quelles séquences s'hybrident tes amorces, facilitant ainsi le design d'amorces plus spécifiques.  [...]

[Biologie Moléculaire] hybridation in situ

je veux réaliser une hybridation in situ en utilisant des sondes marquées par cy3 et FAM sur des cellules d'amibes, je veux savoir est ce que la température (Tm) intervient dans la réaction d'hybridation.  [...] si oui, dans un article publié dit que la température d'hybridation ne doit pas passer 52°c pour ne pas perdre le signal, que je doit faire la réaction n'a pas marché, j'ai changé tout les paramètres sauf la T°, que je doit faire pour que la réaction marche.  [...]

[Divers] révélation d'une sonde couplée à la peroxydase

Cette variante de la technique classique du FISH utilise des sondes couplées à la peroxydase ce qui permet, après la première étape d'hybridation ARNr16S-sonde, de réaliser une amplification du signal en utilisant des tyramides fluorescentes.  [...] Si un de vous a déjà essayé ceci, ou alors un autre système d'amplification du signal à partir de peroxydase (sur sonde ou anticorps), j'aimerais bien avoir votre avec avis avant de me lancer dans cette manip.  [...]