• Santé - Série, Plasmide, Expression, Promoteur

[Biologie Cellulaire] gal4

Vous avez des systèmes double hybride avec une complémentation gal4-VP16 pour trouver des protéines interagissantes entre elles. Vous avez aussi des tests en culture cellulaire avec des fusions Gal4-protX sur constructions 17m-rapporteur. Elles permettent de tester l'activité activatrice ou répressive sur la transcription.   [...] il y a aussi tout simplement toute une série de plasmide d'expression posssedant le promoteur GAL4, qui permet d'induire l'expression du gene cloné qu'en absence de glucose (en presence de galactose par expl).  [...]

[Biologie Moléculaire] Promoteurs, gènes et plasmides

il faut surtout faire attention qu'il soit spécifique de là ou tu vas faire exprimé ton plasmide, car un promoteur bactérien est différents d'un promoteur eucaryote ou viral.  [...] par exemple si tu veux mettre un gène humain dans un plasmide et faire exprimer ce plasmide dans une bactérie tu dois avoir un promoteur bactérien, sinon la machinerie cellulaire ne le reconnaitra pas.  [...]

clonage qui ne fonctionne pas ? ratio ?

En fait je part d'un plasmide contenant l'insert qui a été fournit par un collaborateur, le but c'est d'extraire l'insert par digestion enzymatique purifier a partir d'un gel d'agarose ainsi que le plasmide vide, ligaturer plusieurs fois l'insert en serie afin de créer des répétitions puis de le recloner dans le plasmide initial qui a lui aussi été extrait du gel.  [...] Svenn on est bien d'accord, mais visiblement les bactéries se transforment bien et poussent, et le simple vecteur coupé et (normalement) recircularisé ne fonctionne pas. D'ou mon interrogation sur la ligation, et ma suggestion de controler le plasmide seul, linéarisé puis après ligation sur gel.  [...]

Calcul de ratios en real time RTqPCR: Combinaison de gènes de référence.

J'étudie le niveau d'expression d'un gène A, j'ai à ma disposition 40 échantillons (d'ARN total issu d'extraction). Je ne peux passer que 10 échantillons par série sur les machines de RT qPCR. Je dois donc les passer en 4 fois. Pour homogénéiser les differentes séries, je dispose d'un échantillon calibrateur que j'utilise à chaque série de RTqPCR.  [...] Je me suis rendu compte que le niveau d'expression en ARN de GAPDH n'est pas stable d'un échantillon à l'autre, j'ai ajouté deux autres gènes de référence (ESD et PLOR2A).  [...]

[Génétique] pb clonage moléculaire

Une masse moléculaire peu élevée des plasmides car, ils sont faciles à manipuler, ils sont présents en beaucoup d'exemplaire ce qui facilite leurs isolement, mais surtout amplifier l'expression de tout les gène qui y sont clonés. En plus leur taille augmente la probabilité d'y trouver des sites de restriction unique.  [...] Un site unique pour une série d'endonucléases de restriction, localisé de préférence dans des gènes dont l'expression phénotypique est facilement.  [...]

[Biologie Moléculaire] vecteur

j ai une serie 6 enzyme de restriction et on me demande comment faut il preparer le plasmide,par que enzyme de restriction parmi les 6(bsrDIBSALASELECORIBAMHI PSTI),et en fait j aimerai savoir comment voit on quand il y a incompatibilite entre les extremite cohesive d un fragment digéré par une enzyme (dans mon cas c est NDei)et un plasmide ouvert.  [...] L'insertion d'une séquence d'ADN bicaténaire dans un plasmide nécessite un traitement préalable par une enzyme de restriction. On choisit une enzyme qui a un site unique dans la séquence plasmidique. Après action de l'enzyme de restiction, le plasmide circulaire est linéarisé.  [...]

Syndrome des coeurs brisés

J'ai vu un épisode de la série Dr House hier soir, et j'ai été surpris de découvrir que l'expression coeur brisé pouvait devenir réalité. Ce serait un problème hormonal, mais pas que.  [...] Ben c'est dans la lignée du tako tsubo en outre (il existe d'autres types d'angor non athérosclérotiques. le pseudo-infarctus etc). Trop de catécholamines sécrétées, puis ballonisation de la région apicale avec hypokinésie apicale gauche.   [...]

Perspectives | Dossier

Mais cette auto activation nécessite une série d'expériences qui doit consister à introduire le promo-teur de NPR1, associé à un gène rapporteur, dans une cellule végétale ou de levure, puis mettre cette dernière en contact avec NPR1. Si l'expérience se révèle positive, alors le consensus définit par l'analyse bioinformatique correspond effectivement à une réalité biologique.  [...] Une seconde série d'expérience sera d'élaborer un promoteur SAR artificiel afin de déterminer l'importance des posi-tions des boîtes.  [...]

[Divers] [biologie du développement] Embryon : cellules intelligentes ???

Comment, lors de l'évolution d'un embryon pour devenir être humain, les cellules savent ou se placer dans le corps et savent les limites de construction d'un bras ou d'une jambe, par exemple Les cellules ont-elles une mémoire, sont-elles dirigées par le cerveau de la mère porteuse Comment ce processus est-il si bien géré et comment fonctionne t-il.   [...] La construction et l'emplacement des differents organes est réalisé par une série de gènes (les gènes homéotiques ) dont l'expression depend de l'emplacement des cellules dans l'embryon. Ainsi en fonction de leur localisation certains genes seront exprimes et pas d'autres.  [...]

[Biologie Moléculaire] Dégradation de la cycline D1

La progression des cellules eucaryotes à travers le cycle cellulaire dépend de l,activité d'une série de complexes composés des cyclines et des kinases dépendantes des cyclines. La cycline D1 subit une protéolyse dépendante de l'ubiquitine, importante pour conserver son niveau d'expression.  [...] Une approche possible, et qui avait été réalisée par un estimé collègue est une approche siRNA genome-wide. En Français, cela veut dire que tu éteins l'expression de l'ensemble de l'ubiquinome avec des siRNA et tu regardes l'effet de chaque extinction d'ubiquitine ligases sur la stabilité de la cycline D1 dans des conditions optimales définies au préalable (déprivation en facteur de croissance, stimulation par facteurs de croissance puis déprivation, ou que sais-je encore...).  [...]