• Santé - Séquence, Rapporteur, ARN

[Biochimie] recombineering...

cependant, les ressources que nous possédons pour le moment ne me permettent pas d'introduire la séquence du rapporteur au début de l'ARN non traduit, car les mutants disponibles pour l'intégration du gène rapporteur sont limité(nous utilisons des attP-attB), donc je n'ai qu'un exon disponible au milieu de l'ARN.  [...] je ne connais pas la proportions d'ARN qui n'ont pas ces structures, mais je pense que je vais partir du principe que mon ARN les contient, et je vais juste mettre une séquence kozak bien placée avant le rapporteur peut être, mais des gars de mon labo me disent que c'est pas la peine, car parfois ça fonctionne sans.  [...]

[Génétique] Systeme GAL4/UAS

On a appelé la séquence UAS pour upstream activating sequence. La protéine GAL 4 se fixe sur la séquence UAS et déclenche la transcription par l'ARNpol. Les chercheurs ont pensé que cet ensemble facteur de transcription + séquence UAS pourrait être un bon système rapporteur.  [...] De cette façon, dans les années 90, un grand nombre de lignées enhancer trap a été généré, certaines exprimées dans le cerveau, d'autres dans les ailes, dans les soies du thorax, etc... Il fallait étudier le profil d'expression du transgène grâce à un gène rapporteur, puis les lignées étaient mises à la disposition de le communauté, pour ceux que ça intéressaient.  [...]

[Biologie Moléculaire] séquences régulatrices

Je pensais à isoler la séquence en utilisant une banque d'ADN génomique et vérifier que la séquence isolée est la bonne en fusionnant un gène rapporteur (qui coderait pour la protéine GFP, par exemple) et d'en vérifier l'expression dans le tissu en question.  [...] Il y a de l'idée. En premier lieu, je suppose que tu compte isoler ta séquence depuis une banque d'ADN génomique par PCR...Dans ce cas, une fois ta séquence amplifiée, un séquençage est la première chose à faire. En effet, dans le cas où tu n'isole pas la bonne séquence, la fusion avec un gène rapporteur peut te donner un résultat faux-positif (ou faux-négatif si un problème survient pendant la réalisation de la construction).  [...]

[Biologie Moléculaire] Gène Rapporteur

- soit on place le gène rapporteur après la séquence régulatrice (promoteur), c'est-à-dire qu'on remplace le gène qui nous interesse par le gène rapporteur, et ceci nous permettra de mesurer l'expression du gène.  [...] je ne comprends pas comment ça se fait que si on place un gène rapporteur à la suite d'une séquence régulatrice on va alors avoir la localisation du rapporteur(GFP) de notre gène d'intérêt.  [...]

[Biochimie] Empreinte à la DNase+ TAMOXIFENE

Si on place une protéine dans le milieu avant digestion et que celle-ci se fixe sur une séquence d'ADN, on observera disparition de certaines bandes. comme l'ADN n'est marqué qu'aux extrémités, on peut savoir grossièrement où la protéine s'est fixée.  [...] Pour détecter une séquence enhancer ou silencer d'un gène d'intérêt, il faut démontrer que la délétion ou la mutation de la séquence entraîne une modification de l'expression du gène régulé (ou du rapporteur ayant pris la place du gène).  [...]

[Biologie Moléculaire] Promoteur banque BAC

J'aimerai globalement connaitre la démarche pour récupérer une séquence promotrice d'une banque BAC pour ensuite le cloner dans un vecteur rapporteur et étudier ce promoteur.  [...] Pour cela comment cela fonctionne et comment puis je être sur que les clones contiennent ma séquence promotrice complète.  [...]

[Biologie Cellulaire] Séquence nucléotidique des protéines.

Merci pour la reposes cest bien ce que je supposais. Ça me rassure. Ainsi que pensez vous alors de la citation On raboute a la séquence de nucléotide d'une protéine dite rapporteur. Une enzyme.  [...] On raboute suggère plutôt que l'on est en train de parler de clonage. Il s'agirait donc de l'ADNc que l'on insert dans un vecteur (vecteur d'expression) en phase avec la séquence codante pour une enzyme (betagalactosidase, lucide case, chloramphénicol acétyle transférase, etc).  [...]

mesure de l'expression d'un gene

Il est donc possible de remplacer le gene en question par un gene rapporteur (dont l'activité de la proteine est facilement quantifiable B-galactosidase, luciferase etc...).  [...] Je ne peux pas utiliser de système rapporteur, car je veux étudier un couple d'ARN sens et antisens dont les sequences se chevauchent. Ce n'est pas la force des promoteurs qui m'intéresse, mais la transcription de l'un par rappport a l'autre, et peut etre l'effet de l'anti-sens sur le sens.  [...]

[Biochimie] étude de promoteur

Faire une analyse bioinformatique de ton promoteur (sequence) pour voir s'il y des séquences spécifiques à certains facteurs (tu sauras déjà mieux dans quelle direction aller...).  [...] Une manip' envisageable est de faire un test rapporteur dans une lignée cellulaire. Vous clonez votre promoteur ou des morceaux de votre promoteur en amont de la séquence codante d'un gène rapporteur (CAT, Luc). Vous cotransfectez avec un plasmide codant pour votre facteur de transcription.  [...]

[Biologie Moléculaire] exercice sur la traduction et la biosynthese des protéines

en ce qui concerne la translecture, le terme n'apparait pas dans mon poly, on a juste évoqué la possibilité de reconnaître un terminateur de facon non systematique, mais la ca se situerait au niveau de la transcription, or les deux peptides sont produits a partir d'une meme sequence ARNm, la transcription a déjà eu lieu.  [...] Il a été montré que la séquence CAA UAG CAA UUA, également conservée dans d'autres virus de plantes (cf. ci-dessous), était suffisante pour promouvoir 5% de traduction du codon stop mesuré avec un système rapporteur dans des protoplastes de tabac (Skuzeski et al. 1990).  [...]