• Santé - Séquence, Protéine, Rapporteur

[Biologie Cellulaire] Fusion transcriptionnelle et traductionnelle

Après traduction tu auras ta protéine d'intérêt (celle codée par la séquence codante 1) + une protéine codée par un gène rapporteur, comme la GFP.  [...] Maintenant si tu veux non plus localiser une protéine d'intérêt mais quantifier l'activité d'un promoteur donné entre plusieurs conditions, tu peux construire quelque chose comme [promoteur d'un gène d'intérêt]-[5'UTR]-ATG-séquence codante d'un gène rapporteur-STOP-[3'UTR et terminateur de transcription].  [...]

[Biologie Moléculaire] Gène Rapporteur

Mais c'est assez difficile, la séquence peut inhiber la structure tertiaire de la protéine rapporteuse et donc on ne verra rien.  [...] si je comprends bien, si l'on veut connaitre la localisation de la protéine d'intérêt avec une séquence régulatrice(recombinaison homologue), il faut forcément que le transgène possède une séquence d 'ADN de localisation (ex.NLS qui soit identique à la séquence d'ADN de localisation de la protéine d'intérêt) et le gène rapporteur.  [...]

[Biologie Cellulaire] Séquence nucléotidique des protéines.

Effectivement, ce serait plutôt de séquence peptidique dont il faudrait parler. C'est donc soit une erreur, soit un abus de langage renvoyant à la séquence du gene ou de l'ARNm codant pour la dite protéine.  [...] Merci pour la reposes cest bien ce que je supposais. Ça me rassure. Ainsi que pensez vous alors de la citation On raboute a la séquence de nucléotide d'une protéine dite rapporteur. Une enzyme.  [...]

[Biologie Moléculaire] séquences régulatrices

Je pensais à isoler la séquence en utilisant une banque d'ADN génomique et vérifier que la séquence isolée est la bonne en fusionnant un gène rapporteur (qui coderait pour la protéine GFP, par exemple) et d'en vérifier l'expression dans le tissu en question.  [...] Il y a de l'idée. En premier lieu, je suppose que tu compte isoler ta séquence depuis une banque d'ADN génomique par PCR...Dans ce cas, une fois ta séquence amplifiée, un séquençage est la première chose à faire. En effet, dans le cas où tu n'isole pas la bonne séquence, la fusion avec un gène rapporteur peut te donner un résultat faux-positif (ou faux-négatif si un problème survient pendant la réalisation de la construction).  [...]

technique du double hybride

Si il y a interaction, il y aura reconstitution du facteur de transcription actif du fait de la proximité des domaines de liaison à l'ADN et du domaine de transactivation. Du coup le gène rapporteur sera activé.  [...] Ainsi pour avoir activation du gène rapporteur il faut une mise en contact du domaine d'activation au domaine de fixation. Ceci étant réalisé si il y a intéraction entre protéine X et Y.  [...]

[Génétique] Systeme GAL4/UAS

la protéine GAL 4 est une protéine de levure. C'est un facteur de transcription. On a découvert, chez la levure toujours, une séquence d'ADN (minimale) qui placée devant une séquence codante (quelconque) suffit à déclencher sa transcription, en présence de la protéine gal4.  [...] On a appelé la séquence UAS pour upstream activating sequence. La protéine GAL 4 se fixe sur la séquence UAS et déclenche la transcription par l'ARNpol. Les chercheurs ont pensé que cet ensemble facteur de transcription + séquence UAS pourrait être un bon système rapporteur.  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

Ce vecteur ne sert donc pas à produire n'importe quelle protéine mais à mettre les séquences qui vont permettre de promouvoir la transcription du gène rapporteur luciférase.  [...] PinPoint contient un promoteur tac de transcription suivi de la séquence d'un tag-Xa. Le tag est un petit peptide qui permet de purifier la protéine indépendamment de la protéine d'intérêt, il est suivi de Xa qui est une protéine qui peut être clivée et permet de donc de retirer le tag après purification pour n'avoir plus que la protéine native.  [...]

proteine transmembrannaire et double hybride

je voudrais piéger et identifier le(s) partenaire(s) de ma proteine favorite. Je pensais a un crible double hybride, mais j'ai une grosse interrogation, ma proteine etatn transmembranaire n'y a til pas un risque qu'elle ne se relocalise pas au noyau empechant ainsi l'activation du gene rapporteur si c le cas y a-t-il d'autres methodes pas trop lourdes (j'aimerait eviter d'avoir a sequencer les partenaires proteiques).  [...] pour trouver les partenaires d'une protéine je fais une immunoprécipitation suivie d'un western. Et pour éviter d'aller trop à la peche, une coloration au bleu avant, histoire d'avoir une idée de la taille de ce que j'ai précipité.  [...]

hybridation in situ vs rapporteur

L'hybridation in situ détecte les ARNm alors que dans le cas du rapporteur, on visualise une protéine ou son produit, mais comme cette protéine n'est pas le produit du gène étudié, on ne peut rien en déduire sur une éventuelle régulation post-transcriptionnelle ou -traductionnelle, si.  [...] Ca depend comment est realisee la fusion, il est possible de faire une fusion traductionnelle du gene rapporteur avec la proteine d'interet afin de detecter la localisation de celle ci. Dans ce cas, il est recommande de transformer une telle construction dans un mutant pour le gene d'interet afin de voir si la proteine de fuision complemente le phenotype (un tres bon controle).  [...]

[Biologie Moléculaire] différence entre 2 plasmides

Bonnjour à tous, voilà je lis un article en anglais sur une technique pour réprimer le gène PAX3 qui serait à l'origine d'un rhabdomyosarcome (dû à une translocation chromosomique), dans l'article on parle de expression plasmid et reporter plasmid je ne vois pas de quoi il s'agit, quelqu'un pourrait il m'aider merci beaucoup.   [...] Si la protéine se fixe sur le promoteur elle va induire la transcription et la traduction d'une protéine rapporteur le plus souvent la luciférase qui émet de la lumière. L'activité de la protéine testée va donc être rapportée par la quantité de lumière émise.  [...]