• Santé - Séquence, Protéine, Fusion

[Biologie Moléculaire] Protéine de fusion

Pour réaliser une protéine de fusion, la plupart du temps on ligue une séquence de restriction en 3' de l'ADNc codant la protéine N-terminal et la même séquence de restriction en 5' de l'ADNc codant la protéine C-terminale. On choisi une séquence qui une fois clivée génère des bouts collants.  [...] Pour faire une protéine de fusion AB, il te suffit simplement de mettre la séquence codante de B juste à la suite de celle de A. Il faut juste enlever le codon stop à la fin de la séquence de A (sinon tu ne produiras que la protéine A). Tu vas alors obtenir un seul ARNm qui sera traduit en protéine AB.  [...]

[Biotechnologie] purification d'une protéine

Là est le problème...Je ne comprend pas par quelle téchnique on peut purifier cette protéine dont on connait uniquement la séquence... peut-on purifier la protéine grâce aux résultats obtenues dans les différentes expériences.  [...] Je ne suis pas du tout experte en purification de protéines mais en lisant les différentes étapes de la manip je me dis qu'en insérant la séquence codante pour la ligase dans E. coli, ils ont peut être en même temps créé une protéine de fusion avec une étiquette (par exemple GST ou Tag) et ont pu ensuite purifier cette protéine de fusion sur une colonne d'affinité.  [...]

[Biologie Cellulaire] transfection

et j'aurais besoin d'une confirmation (et promis après j'arrete.xD), la transfection permet d'étudier la protéine synthétisé à partir de l'adn c transfecté ou d'étudier les conséquences de la présence de cet ADN.  [...] On peut aussi utiliser un plasmide qui code pour une protéine de fusion. la séquence nucléotidique de la protéine est flanquée de celle d'un fluorophore qui va être transcrit et traduit en même temps que la protéine. Ainsi, par microscopie à fluorescence, les cellules fluorescentes sont celles qui ont intégré le plasmide et exprimé la protéine d'intérêt.  [...]

[Biologie Moléculaire] cDNA et TAG quelle relation?

et pour le plasmide pTTQ18 on dit que c'est un plasmide qui ne présente pas de cDNA,et pour ça on peut pas purifié le protéine recombinante qui en résulte par chromatographie d'affinité on utilisons le protéine de fusion issu de la traduction de la sequence TAG. est ce que c'est juste.  [...] - la seconde est une notion de biochimie. Un TAG comme par exemple le TAG histidine est une courte portion d'acides aminés permettant notamment de purifier une protéine produite par génie génétique. Dans ce cas, la séquence en ADN codant pour ce tag est insérée au début du gène d'intérêt dans un plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] longueur primers pour un clonage

Je dois réaliser un clonage mais j'ai un probleme, mon primer Forward a une longueur de 60 pb, dont 40 pb flottantes (qui ne s'hybrident pas sur mon cDNA mais qui me permettent d'introduire une sequence pour creer un linker afin de generer une proteine de fusion).  [...] Je me demandais si ma PCR avait des chances de marcher vu la longueur astronomique du primer.   [...]

[Biochimie] Extraction proteine nucleaire nematode

Sinon tu peux taggé ta proteine mais ca va te prendre du temps, si tu as la séquence tu fais un histidine tag ou une fusion avec la gst et tu isole sur colonne d'affinité. Mais pour ca va falloir faire des constructions, les microinjecter, et avoir des vers transgéniques.  [...] Bon je ne suis qu'étudiant pour le moment, donc je te déblatère ce que j'ai vu en cours. J'ai un peu bossé sur le nématode en stage mais j'ai pas purifié de proteine.  [...]

Pourquoi utiliser le vecteur pH6EX3 pour faire du clonage moléculaire?

Dans une séance de laboratoire, on a utilisé le vecteur pH6EX3 pour y insérer un gène qui code pour la protéine BIP, pour transférer tout ça dans des bactéries E.coli. Je me demandais pourquoi on a utilisé ce verteur et pas un autre.  [...] peut être parce que ce plasmide permet de tagger l'insert avec un 6His. En fait cela permet de produire une protéine de fusion constituée de la séquence codée par l'insert et du tag 6xHis, tag qui peut être utilisé ensuite pour de la purification sur colonnes style NiNta, pratique pour avoir un peptide pur (ou presque).  [...]

[Biochimie] Séquence Kozak

j'ai reçu des plasmides contenant des protéines couplées en N term à une protéine fluorescente. Dans certains plasmides il y a deux séquences kozak et dans d'autres non.  [...] D'un point de vue moléculaire, que se passe-t-il quand on une séquence Kozak devant chaque atg quid de la protéine fusion du tag.  [...]

[Biotechnologie] Anticorps chimérique

Bonjour à tous, j'étudie en ce moment le rôle du rituximab, qui est un anticorps monoclonal anti CD20 qui est une protéines transmemebranaire présente à la surface des lymphocytes B, cet anticorps est censé déclencher l'apoptose et lutter ainsi contre les lymphomes.  [...] je suppose qu'on peut faire ça par protéine fusion, en connaissant la séquence de chacune des parties.  [...]

Protéine de fusion recombinante dimérique, besoin d'aide.

Pour une protéine de fusion, les deux séquences codantes sont mises à la suite l'une de l'autre sans codon stop entre les deux. une seule chaîne est produite.  [...] Si l'écotine se dimérise, il suffit de faire un seul vecteur avec un gène fusionnant écotine et proinsuline, et la dimérisation de cette protéine de fusion se fera spontanément via le domaine écotine.  [...]