• Santé - Séquence, Banque, ADN

[Biologie Moléculaire] séquences régulatrices

Je pensais à isoler la séquence en utilisant une banque d'ADN génomique et vérifier que la séquence isolée est la bonne en fusionnant un gène rapporteur (qui coderait pour la protéine GFP, par exemple) et d'en vérifier l'expression dans le tissu en question.  [...] Il y a de l'idée. En premier lieu, je suppose que tu compte isoler ta séquence depuis une banque d'ADN génomique par PCR...Dans ce cas, une fois ta séquence amplifiée, un séquençage est la première chose à faire. En effet, dans le cas où tu n'isole pas la bonne séquence, la fusion avec un gène rapporteur peut te donner un résultat faux-positif (ou faux-négatif si un problème survient pendant la réalisation de la construction).  [...]

Dénaturation de l'adn en pH acides

Certaines enzymes de restrictions ont des fréquences de coupures plus grandes suivant la complexité de la séquence reconnue.  [...] heu... ben southern blot c'est le nom de la methode. Le principe de la methode est d'hybrider une sequence d'ADN connue sur un pannel de sequence d'ADN inconnues (banque d'ADN, ADNg coupé par des enzymes de restriction, etc...) pour mettre en evidence la presence ou l'absence de la sequence connue.  [...]

effet Antisens. A l'aide!

Le peuplier a normalement dans son ADN un gène codant pour une enzyme. Afin d'inhiber son expression, l'INRA a isolé d'une banque d'ADNc la séquence de cette enzyme et l'a introduite en position ANTISENS.  [...] quelqu'un peut-il m'éclairer comment une séquence d'ADNc (similaire au gène) mise en position antisens peut-elle inhiber le gène.  [...]

[Biotechnologie] Problèmes sur les notions/calculs de plasmide

Donc, ici, j'obtiens 14842 pb pour plasmide + insert de la banque ADN génomique et 13361 pb pour plasmide + insert de la banque d'ADNc. Ce qui change mon résultat de la taille de l'insert génomique comparé à ton calcul.  [...] LA différence est de 14842-13361=1481pb. Ce qui confirme que la banque d'ADN génomique soit plus grande que la banque d'ADN complémentaire puisque celle ci n'est composée que d'exons.  [...]

Bioinformatique - Etudes d'une sequence d'ADN

Si ta sequence d'ADN est codante (ce qui est probable vu que les genomes viraux sont denses), alors tu peux traduire ta sequence en proteine et faire une recherche, comme le disait john, mais cette fois au niveau proteique, ca pourra te donner des elements de reponses plus significatif, voir eventuellement identifier des domaines fonctionnels ou des motifs proteiques.  [...] Blast, c''est le plus facile et le plus lisible c'est blast, ORF contre ORF, mais fait aussi un Blast ADN vs ADN, car si il y a une erreur de séquence provoquant un stop ou un décalage de cadre (dans la tienne, ou dans la banque) tu peux perdre de l'info, il y a beaucoup d'erreurs dans les banques, par ex fais un Blast en utilisant le polylinker d'un pUC quelconque, tu verras.  [...]

[Biotechnologie] Concrètement c'est quoi une banque d'ADN

Par exemple, une boite de pétrie, dans laquelle il y a des souches bactériennes ayant incorporées des séquences d'intérêts, peut elle être qualifié de banque d'ADN.  [...] Dans une banque on cherche à garder des séquences d'intérêts intactes. Alors comment évite t'on des recombinaisons qui pourraient altérer les séquences Ces recombinaisons ne touchent elles pas les gènes insérés.  [...]

[Biologie Moléculaire] ARN antisens à partir d'un fragment de gène

2) on a ainsi une séquence ADN en clair. On va faire dans une chambre de synthèse un oligonucléotide d'ARN nucléotide par nucléotide qui sera complémentaire à cette séquence, donc un brin anti sens (complémentaire à l'ARN sens qui lui est strictement identique à la séquence d'ADN, avec U au lieu de T évidemment).  [...] Par recherche dans les banques de données sur internet vous avez trouvé la séquence du gène de l'hormone de croissance humaine. A quel endroit du gène choisiriez-vous la séquence de votre sonde d'ADN pour cribler la banque que vous venez de construire et trouver l'ADN complémentaire codant pour l'hormone de croissance.  [...]

[Génétique] Manipulation génétique chez procaryote

Une banque genomique de la souche sauvage (WT) E.Coli est prepare dans un plasmide pBR322 qui confere la resistance a l'ampiciline(Amp R). Les plasmides recombinants de la banque sont transforme dans la souche L3 de E.Coli dont le genotype est polA. Trois clones L3 Amp R sont ainsi selectionés.  [...] Tu transformes des bactéries E.Coli, polA -, avec ces plasmides. Si le plasmide (sa séquence intégrée) ne contient pas polA, alors il ne sera pas répliqué et finira par disparaitre. En revanche s'il contient polA il sera conservé.  [...]

Random priming

J'ai bien compris le processus permettant d'obtenir des sondes marquées capables de s'hybrider à un ADN donné. Ce que je ne sais pas, c'est comment ces sondes peuvent s'hybrider spécifiquement à une gène d'intéret de séquence inconnue Après réfléxion, j'en viens même à me demander si c'est seulement possible via cette technique (et donc ce qu'on utilises en pratique pour faire ça).  [...] du coup si l'on souhait sélectionner spécifiquement un gène de séquence non-connue dans un banque d'ADN, la seule méthode serait une sélection par la fonction, non.  [...]

Marche sur le chromosome

La premiere étape consiste a fabriquer une banque de fragment d'ADN genomique sur lequel va etre fixé un adaptateur. Ensuite il suffit de faire une PCR en utilisant une amorce spécifique du fragment d'ADN que tu connai et une amorce spécifique de l'adapatateur.  [...] on possède une sonde marqué d'ADN du début de la séquence du gène que l'on veut séquencer. On possède aussi une banque avec les gène qui nous intéresse.  [...]