• Santé - Séquence, ADN, Intérêt

Intégration dans un plasmide

L'intégration de séquence d'intéret ( un ou plusieurs gènes ) se fait par technique d'ADN recombinant. En gros, tu vas utiliser des endonucléases ( ou enzymes de restriction) qui font créer des extrémitées cohésives ( pouvant être ligasé par une ADN ligase ) sur ta séquence d'intérêt et sur ton vecteur plasmidique.  [...] Pour les integron, oui c'est trés connu comme systeme mais pas utilisé comme tel (enfin je pense) comme outil de biologie moleculaire pour faire du clonage ou autre. Certaines methode (Datsenko & wanner) utilisent par contre une integrase pour augmenter la frequence de recombinaison homologue d'un gene dans un genome (mais la on s'eloigne de ta question).   [...]

[Biotechnologie] Principe de la PCR

effet, si la séquence d'intérêt est présente dans l'extrait d'ADN, il est possible de sélectivement la répliquer (on parle d'amplification) en très grande.  [...] plus crucial que la taille de la séquence d'intérêt est grande. Il est aussi important que l'extrait d'ADN ne soit pas contaminé par des inhibiteurs de.  [...]

[Biologie végétale] pcr : LP/RP et LB/RP pour une plante

Les amorces sont des bouts d'ADN fabriqués artificiellement avec une certaine séquence que l'on choisit. Pour une PCR donnée, on utilise deux amorces, une pour délimiter le début de la région d'ADN échantillon à étudier, et l'autre pour marquer la fin. Tu choisis la séquence de chacun de tes amorces pour viser la séquence d'intérêt (en respectant A avec T, et G avec C).  [...] La différence entre ton gène normal et ton gène muté est justement la portion de gène qui est fixée par LP ou LB. Si c'est le gène normal, seul LP peut se fixer car la séquence nucléotidique ne permet pas à LB de se fixer (c'est ce que je t'ai dessiné avec une forme donnée pour chaque amorce de façon à présenter ça sous la métaphore d'un puzzle).  [...]

[Biologie Moléculaire] Séquencer un long fragment d'ADN

Voila, j'ai voulue séquencer un long fragment d'ADN et pour obtenir la séquence complète, j'ai amplifié la séquence d'intérêt avec une amorce Forward et une amorce Reverse.  [...] En inversant et complémentant la séquence qui commence par la fin (ce qui veut dire qu'elle est antisens), tu vas te retrouver, si tout a bien marché, avec un chevauchement de la séquence anti-sens inversée/complémentée avec la séquence sens (commençant par le début).  [...]

[Biotechnologie] Global Analysis of Protein Activities using proteome chips

En gros, la séquence d'ADN codant pour la protéine d'intérêt est fusionnée à une séquence signal (GST), puis des levures sont transfectées par le plasmide. Donc production de la protéine correctement modifiée et conformée (la protéine d'origine provient de la levure).  [...] Si tu as une protéine complètement inconnu, et pas son ADN, il faudra séquencer les acides aminés de la protéine un à un (en tout cas, le début de la protéine), avant de pouvoir trouver la séquence ADN.  [...]

[Génétique] Choix amorces amplification portion ADN

- l'enzyme de restriction reconnait une séquence (souvent palindrome ) de l'ADN, s'y fixe, mais sous quelle forme est cette enzyme ( est-ce qu elle doit etre complémentaire du brin d'ADN, ou peut importe sa forme, elle reconnait le site, s'y fixe et ne doit pas s'apparier à l'ADN).  [...] pour l'amorce 1, tu commences par l'extrémité 5' du brin proposé ici, et tu dessines l'amorce en prenant la séquence complémentaire à celle proposée, tu auras donc CTT AGG GAG CCA TTT AAC CA, mais ca ne gene pas le sens de lecture de l'ADN pol qui lit de 3' en 5 ' parce que selon ton amorce, elle vient bien se fixer sur l'amorce mais après son sens de lecture sera de 5' en 3', non.  [...]

[Biotechnologie] système conditionnels

J'ai ecris un document qui devrait finir par être publié tot ou tard sur futura-sciences. Si tu as la possibilité d'attendre. le document fais plusieurs pages et il y a à peu près tout pour répondre à tes questions dedans.   [...] Pour faire rapide, tu introduis par recombinaison homologue des sequence de recombinaison de l'ADN (2 sites lox) de part et d'autre de la sequence du gene que tu veux eliminer. Ces sequences lox sont reconnues par une recombinase (Cre) ce qui fait que si tu croises des souris dont le gene d'interet a ete modifie avec des sites lox avec une souris dans laquelle tu as introduit la Cre, si les descendant recuperent les deux genes et (c'est la l'interet du systeme) qu'ils s'expriment dans le meme tissu (choix d'un promoteur specifique en amont de la Cre par exemple), tu auras deletion irreversible de la sequence d'ADN entre tes sites lox et donc un KO conditionnel.  [...]

[Biologie Cellulaire] Système de correction MMR et BER

J'aimerais comprendre pourquoi dans le système MMR doit-on ouvrir l'ADN double brin avec la DNA-Hélicase-II alors que l'endonucléase Mut-H découpe déjà en 5' du G de la séquence GATC Je ne comprends pas l'intérêt d'ouvrir l'ADN double brin en fait =/.  [...] Tu remarqueras aussi l'histoire de spécificité de brin. MutH ne reconnaît pas n'importe quel G de séquence GATC, mais reconnaît un G méthylé. Après la fin de la réplication, le brin parental l'est, mais pas le brin néosynthétisé. D'où la notion d'état hémiméthylé.  [...]

[Biologie Moléculaire] Peux t-on remplacer l'ADN de sperme de saumon par l'ADN d'une autre espèce ?

je comprends pas les interactions non specifiques sont la plus part du temps dues a des interaction electrostatiques ou hydrophobes. La séquence de l'ADN utilisé comme bloqueur n'a aucun interet.  [...] Par contre Yoyo, je suis intéressé par ce que tu dis au niveau de l'interaction entre ARN et la solution de blocage par ADN génomique. Penses-tu vraiment que ce sont des interactions non spé (i.e. indépendamment de la séquence).  [...]

[Biologie Moléculaire] Séquençage problématique

Je fais mes PCR sans problèmes, amplification de la bonne zone, quantité d'ADN (quantifié au nanodrop correct), mais les résultats me posent quelques problèmes. J'obtiens bel et bien ma séquence d'intérêt. MAIS.  [...] J'ai des doubles pics, mais pas des vilains doubles pics de pollutions Ce sont des doubles pics qui se retrouvent toujours aux mêmes sites, pour chaque séquence, mais pas pour toutes les séquences. Ex. séquence de l'individus 12 aura un double pic au site 120, en le séquençant plusieurs fois j'ai TOUJOURS un double pic au site 120.  [...]