• Santé - Séparation, Molécules, Exclusion

[Biochimie] [TP Séparation de molécules par chromatographie d'exclusion sur colonne] Niveau L1S1

Je dois réaliser pour mardi le compte-rendu de mon tp sur la séparation des molécules par chromatographie d'exclusion sur colonne mais je me retrouve bloquée aux questions de chimie.  [...] Le but du TP si j'ai bien compris est de voir ton rendement de cytochrome c par rapport à la quantité théorique initiale, du coup il faut que tu calcules la quantité (en mol) du cytochrome c que tu as récupéré. Mais après je ne vois plus trop comment faire =/ je sais que tu as un volume d'élution à déterminer avec un calcul faisant intervenir le volume mort (volume de la première molécule que tu as élué).  [...]

[Biochimie] lipides

bonjour...désolée, pas compris votre question, mais la lécithine est un phospholipide, molécule amphiphile a une partie hydrophobe constituée par les deux chaines d'acides gras, et une partie hydrophile ou polaire constituée par le groupement ester phosphorique dont la base est la choline.  [...] interactions hydrophobes, par exclusion des molécules polaires. En fait c'est la même raison que l'insolubilité dans l'eau.  [...]

Sephadex G-150

C'est pour faire une séparation de protéines par chromatographie d'exclusion et je ne peux pas prendre du G-100 car sinon il y aurait une partie des protéines de ma solution qui se retrouveraient dans le volume mort.  [...] Sinon il n'existe pas des autres gels types sepharose ou autres qui ont la même capacité de fractionnement que le G-150 voir G-200.   [...]

[Biochimie] Chromatographie d'exclusion sur gel + spectrophotométrie différentielle

En ce moment je suis confronté à l'explication de mon TP (que j'ai mardi). La manipulation consiste à réaliser une chromatographie d'exclusion pour déterminer le poids moléculaire du cytochrome c. Pour l'instant j'ai compris le principe de cette technique, les molécules les plus grosses (bleu dextran) ne passent pas dans les billes poreuses du gel et sont éluées rapidement donc.  [...] Ve dextran = V0 (volume d'exclusion ou mort). Les molécules, dont la taille permet de traverser les billes (fluorescéine. jaune), vont être fortement retardées soit. Ve fluoro. = Vt (volume total). Puis on récupère entre les deux les molécules de cytochrome c (rouge).  [...]

[Biochimie] séquençage d'une proteine

Attention. la HPLC est une technique de séparation qui dépend de la colonne que tu utilises. Tu peux faire une HPLC avec une colonne de chromato d'exclusion, d'affinité, à échanges d'ions etc.  [...] Bien sûr, on aura pas toujours cette possibilité, dans le cas de l'analyse de tout un protéome, je crois que la digestion n'est pas possible, car il est impossible d'avoir une séparation complète des protéines entre elles (à confirmer).  [...]

[Biochimie] L'électrophorèse

Lors du chromatographie d'exclusion (=gel filtration) on utilise des billes inertes possèdant des pores de différents diamètre. De façon très simplifiée, les grosses molécules ne passeront pas à travers les pores, elles seront donc éluées en premier. Les petites molécules passeront à l'interieur des pores et seront éluées en dernier.  [...] Les molécules de tailles intermédiaires seront éluées entre les molécules de petites et de grandes tailles. Cependant attention à ces raccourcis, la sépération ne se fait pas en fonction de la taille mais en fonction du volume hydrodynamique (tient compte de la taille et de la forme ex Globulaire, allongée,...).  [...]

[Biochimie] Domaine de fractionnement d'un gel !!!

En fait, dans la chromatographie d'exclusion les petites molécules peuvent pénétrer dans les billes poreuses et les grosses molécules ne le peuvent pas. C'est pourquoi, les petites molécules ont un temps de rétention plus important que les grosses molécules qui elles sont exclues.  [...] Autrement formulé. lors de l'interpretation d'un spectre de chromatographie d'exclusion moléculaire, qu'on on obtient un pic seulement, on dira qu'on a élué une protéine seulement mais comment intérpréter l'augmentation de la Do et sa diminution.  [...]

[Biochimie] Bicouche de phosphoglycerolipide

Le solvant de l'environnement cellulaire est un milieu aqueux, permettant de solubiliser des molécules hydrophiles. Par principe d'exclusion, les têtes hydrophiles vont chercher à créer des interactions faibles avec l'eau, tandis que les queues hydrophobes cherchent à minimiser leurs contacts avec l'eau.  [...] Il voulait d'ailleurs seulement savoir le rôle de la Bicouche lipidique dans la membrane cellulaire. J'ai répondu que c'était la compartimentation. On pourrait aussi dire un petit rôle dans les échanges car il permet la diffusion passive de certaines molécules.  [...]

chromatographie / électrophorèse

Tout dépend de ce que tu veux faire. une électrophorèse sépare tes protéines en fonction de leur taille. Quant à la chromatographie il faut préciser, car tu as des chromato d'exclusion filtration sur gel (Sephadex) qui permettent la séparation en fonction du rayon de Stokes (et donc indirectement de la taille), chromato d'affinité qui permet de concentrer ton extrait protéique, chromato échangeuse d'ions qui sépare en fonction de la charge de la protéine etc.  [...] Mais je ne suis pas sûre. Sinon il existe les électrophorèses 2D où tu peux séparer à la fois tes protéines en fonction du poids moléculaires et du point isoélectrique.  [...]

séparations de protéines

J'aurais voulu savoir qu'elle est la meilleur technique de séparations de protéines, sachant que je me trouve en présence d'un échantillon où les protéines ont un poids moléculaire assez proche.  [...] De toute façon pour séparer selon les poids moléculaires je partirai plus sur des gels de séparation (éléctrophorèse) que des colonnes de chromatographie. ^^.  [...]