• Santé - Sens, Migration, Protéines

Electrophorèse acétate de cellulose

En l'occurrence justement, quel serait le sens de migration des protéines à un pH de 8 (pH du TAE), sont-elles chargées positivement ou négativement (je suppose que cela peut varier en fonction des protéines).  [...] Du coup, la migration se ferait à la fois selon la taille et la charge des protéines Ou, si l'on considère que leur charge est la même, uniquement en fonction de leur taille.  [...]

Intoxication alimentaire : les salmonelles utilisent l'électricité pour mieux vous infecter

Dans les expériences, l'infection générait un petit champ électrique au niveau de l' épithélium intestinal, ce qui dirigeait les macrophages vers l' anode, le pole positif du champ électrique. Mais in vitro, une fois que les macrophages ont ingéré des bactéries, ils sont attirés par la cathode. leur sens de migration est inversé.  [...] L' ingestion des bactéries par phagocytose inverserait la galvanotaxie. Ce changement est lié aux protéines chargées présentes à la surface des macrophages. De manière imagée, c'est un peu comme si les bactéries actionnaient un interrupteur électrique qui modifie le sens de migration des macrophages.  [...]

[Biologie Cellulaire] Metastase, MMP, intégrines

Les MMP ont une spécificité de dégradation. Elles dégradent certains collagènes, comme le collagène de type IV, qui eux-mêmes peuvent ainsi générer des fragments favorisant l'angiogenèse. Elles dégradent donc les protéines de la matrice extracellulaire qui vont entraver leur migration et pas forcément les aider à migrer via les intégrines.  [...] Je finirais par une petite précision, à creuser chez les MMPs. Certaines sont ancrées à la membrane plasmique. Lorsque la cellule migre, elle est polarisée. Peut-être la cellule se sert de cette polarisation pour placer les MMP membranaire vers l'avant de la cellule, relativement au sens de migration, pour favoriser une dégradation ciblée de la matrice extracellulaire. Ce n'est qu'une hypothèse.  [...]

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Ceci entraîne la suppression des structures secondaires, tertiaires et quaternaires des protéines permettant ainsi une fixation du SDS sur ces protéines et donc de les charger négativement (transformation en anions). La migration électrophorétique ne se fera donc plus qu'en fonction de la masse moléculaire de chaque protéine, étant donné que chacune possède maintenant la même charge.  [...] Dans chaque puits il est déposé l'équivalent de 130 µg de protéines soit 90 µl de la fraction membranaire et 100 µl de la fraction cytoplasmique. La migration électrophorétique se fait à 50 V et pour une durée d'environ 15 heures, en fait c'est le front de migration formé par le bleu de bromophénol qui indique le moment où l'électrophorèse doit être arrêtée.  [...]

les gels de compression et de sépartion

Les gels sont utilisés pour l'électrophorèse, le wester blot intervient après lors du transfert du produit du gel sur une membrane et révélation par anticorps ou réactions enzymatique. Ne confondez pas les deux.   [...] La différence de pH permet une vitesse de migration différente, une migration plus lente permet l'entrée dans le gel et la concentration des protéines. L'effet est lié au pI de la glycine du tampon de migration.  [...]

Matériels et méthodes | Dossier

La migration électrophorétique ne se fera donc plus qu'en fonction de la masse moléculaire de chaque protéine, étant donné que chacune possède maintenant la même charge. L'électrophorèse a pour but de séparer les protéines sur un gel de polyacrylamide, ensuite ce gel est mis en contact avec une membrane de nitrocellulose et un courant allant du gel vers la membrane ce qui permet de fixer les protéines contenues dans le gel sur cette membrane.  [...] Dans chaque puits, il est déposé l'équivalent de 130 µg de protéines soit 110 µl de la suspension. La migration électrophorétique se fait à 50 V et pour une durée d'environ 15 heures, en fait c'est le front de migration formé par le bleu de bromophénol qui indique le moment où l'électrophorèse doit être arrêtée.  [...]

[Biochimie] Sds page

Vous pouvez bien entendu faire varier la tension pendant la migration (une pénétration des protéines en douceur dans le gel, suivit d'une migration plus énergique).  [...] Donc pas de migration des protéines. Les ampères ne varient normalement pas beaucoup dans un gel (sauf si celui-ci présente des dépots solides de sels, qui s'assechent...). Bref, si au départ de la migration, les ampères sont normaux, et que à la fin de la migration, ils sont indétectables, c'est que le courant ne passe plus, ou a tellement ralenti qu'il ne fait plus migrer les protéines (ou très peu).  [...]

[Biochimie] Modifications post traductionnelles et électrophorèse !

Non pas à ma connaissance. Pour mes protéines après migration à 80V dans le stacking et 130V dans le separating, je transfère en liquide pendant 1h30 à intensité fixe 350 mA, puis les autres étapes sont inchangées par rapport à d'autres westerns sur d'autres protéines.  [...] Oui mais ça reste toujours une question de taille et non de masse, la masse découlant de la taille de la protéine. Le critère permettant la séparation des protéines est la taille, plus exactement comme disent les biophysiciens le volume hydrodynamique de la protéine qui va déterminer sa vitesse de migration au travers des mailles du gel.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique Laurière et Western Blot

Il vous faut optimiser votre ampérage/temps de migration afin d'avoir un équilibre grosse protéines transférées/petites protéines perdues.  [...] Vous pouvez également pousser le temps et le courant au maximum pour avoir la totalité de vos grosses protéines et faire sortir complètement vos petites protéines et rajouter une seconde membrane derrière la première pour faire un western sur les deux en parallèle.  [...]

[Identification] Identification d'une protéine sérique

j'aurai besoin de réponses. Voilà, cette semaine j'ai effectué une migration sur gel de plusieurs échantillons de sérums humains différents. Il s'agit d'électrophorèse SDS PAGE. La migration des protéines sériques se fait donc en fonctions de leurs tailles.  [...] Je te conseille de refaire migrer les échantillons avec le marqueur de poids moléculaires. On peut aussi envisager qu'il s'agisse de protéines non sériques (problèmes de purification), d'éventuels précurseurs ou bien au contraire de produits de dégradation de protéines sériques.  [...]