• Santé - Saturation, Sites, Hybridation, Lavage

[Biologie Moléculaire] Hybridation in situ et digoxygénine

Fixation au formaldéhyde (+ coupes si l'organisme n'est pas étudié in toto ) =. Perméabilisation (traitement à la protéinase K) =. Hybridation (ajout de la sonde ARN complémentaire) =. Lavage (élimination des sondes qui ne complémentent pas) =. Saturation des sites anticorps anti-digoxygénine =. Révélation (phosphatase alcaline etc.).  [...] De plus, pourquoi faire la saturation des sites Ac anti-digoxygénine après l'hybridation et le lavage alors qu'en immmunodétection on sature (à la BSA par exemple) avant l'incubation avec l'Ac primaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Criblage d'une banque d'ADNc

...je pense qu'on pourrait directement étaler ces ADNc dans des boite avec la géllose molle puis faire un filtre de nylon pour avoir le transfert et travailler dans le propre ensuite la fixaton des olygonucléotides dégénérer, saturation, hybridation, lavage et autoradiographie.  [...] de 2. on n'en est pas encore à la détection de la molécule unique d'ADN, surtout pas hybridation (eventuellement par QPCR, et encore).  [...]

[Biologie Moléculaire] Sperme de saumon

En biologie moléculaire, il est très courant d'utiliser le sperme de saumon dans les techniques d'hybridation des acides nucléiques pour saturer les membranes. Je me demande comment et quel est le principe de cette saturation Est-ce de l'ADN pur qui est dans le sperme qui sert à s'hybrider aux sites vides de la membrane.  [...] Une autre explication peut aussi être la saturation des séquences répétées au niveau des séquences d'acides nucléiques cibles, la encore pour éviter les fixations aspécifiques.  [...]

Questions sur l'Enzymologie

1- Tout d'abord, je sais que les enzymes augmentent la vitesse initiale et abaissent l'énergie d'activation mais augmentent-elles ou diminuent-elles l'intensité de la réaction.  [...] Ne pensez-vous pas que cette discussion serait mieux dans le forum Biologie que dans ce forum Chimie Déja pour répondre à la question posée, pour mieux retrouver cette discussion lors de recherche notamment.   [...]

[Immunologie] ELISA coating et conservation

J'ai lu quelques informations là dessus qui préconisaient de coater les plaques puis le lendemain de faire le premier lavage et de déposer le tampon de saturation (blocking buffer) puis de laisser évaporer à température ambiante. Une fois les plaques sèches elle seraient conservables une semaine.  [...] Sinon je suis entrain de tester une autre méthode que j'ai intitulée à l'arrache. En effet, suite à une erreur dans mes préparation, je me suis retrouvé avec une plaque 96 puits entièrement coatée alors que j'avais absolument besoin de strips. Du coup je vais en profiter pour voir ce que ça donne juste en scellant la plaque avec un adhésif après saturation et lavage et en conservant à 4°C.  [...]

Immunomarquage de la rétine du macaque

On rince de nouveau, puis on (peut, c'est pas toujours réalisé, cela dépend des expériences) saturer les sites de réaction de l'anticorps de chèvre avec un sérum de chèvre.  [...] Bref, ces étapes de saturation permettent de s'assurer que les sites non spécifiques sur la lamelle ne vont pas être détectés par notre anticorps (cela serai ennuyeux). On les recouvre donc avec une protéine bidon, l'albumine contenu dans le sérum.  [...]

[Biologie Cellulaire] Manip de co-IP??? what's wrong!!!

Il y a autre chose qui pourrait expliquer le problème. satures-tu tes billes protéine G sépharose avec de la BSA Certaines protéines se fixent sur la sépharose et/ou sur les protéines G. Une étape de saturation peut donc s'avérer nécessaire pour masquer les sites potentiels d'interaction non spécifique.  [...] Je pense que ta première explication est la bonne. Tu dois trainer de la chromatine insoluble que tu retrouves dans tes culots d'IP. Fais un préclearing de ton extrait (centrifugation à fond pendant au moins 15 minutes) avant d'incuber avec ton anticorps et tes billes.   [...]

[Immunologie] Test elisa

je ne voit pas, si l'on sort du contexte du test Elisa, pourquoi il faut diluer une solution d'anticorps. Je comprend que si la solution d'AC et trop peu concentrer tous les AG ne seront pas détectés mais en cas d'excès En effet si l'anticorps est en forte concentration par rapport a l'antigène le surplus est logiquement enlever par les étape de saturation et/ou de lavage au détergent.  [...] Est-ce suffisant cela peut aussi poser problème si je fais un autre test elisa dans le but et de doser un antigène puisque si ma concentration en antigène et très forte la quantité d'ac sera inférieur a la quantité d'AG. quel est la solution dans ce cas on procède a des dilutions de l'échantillon d'antigène.   [...]

[Biochimie] Du Charbon vegetal qui absorbe du Gaz ?

La seul explication donné est que le charbon est poreux. Et alors Il faudrait une contrainte permanente pour faire rentrer autant de gaz dans un si petit volume de charbon, genre des milliers de bars. Ou alors il faudrait qu'il y ai transformation du gaz en un autre produit. Ou alors c'est du pure mensonge.   [...] [41] The authors suggested that saturation of charcoal binding sites during its passage through the gut was the reason for this. A further study concluded that activated charcoal (4 g) does not influence gas formation in vitro or in vivo.[42] Other authors reported that activated charcoal was effective.  [...]

le Pouvoir oxyphorique ?SVP aidez moi, une notion qui m échappe complètement :/

Je détaille. 1 mole (= 64500g) d'hémoglobine peut lier à saturation (donc au maximum) 4 moles d'O2 (= 22 400mL). T'es d'accord avec ça (Une protéine d'hémoglobine contient 4 sites de fixation d'O 2 ).  [...] Dans le document 2, on parle de saturation. La saturation = capacité maximal de transport, soit 4 O 2 dans le cas de l'hémoglobine.  [...]