• Santé - RPM, Protéine, Membrane

Séparer membrane et cytoplasme

Les centri qui sont à ma disposition ne peuvent monter plus haut que 15 000 rpm et 21 000g Je cherche à démontrer que ma protéine effectue bien un shift du cytoplasme vers la membrane. Merci.  [...] Question bête certainement, mais pourquoi n'utilises-tu pas de la microscopie à épifluorescence pour montrer que ta protéine est dirigée vers la membrane.  [...]

[Microbiologie] Protocole technique de double hybride (Yeast two-Hybrid)

Pour l'étude de l'interaction entre deux protéines bactériennes, je réalise en ce moment des expériences de double hybride (Yeast two-Hybrid), enfin j'essaye. Une technique qui n'est pas utilisée dans mon labo en ce moment (enfin, pas depuis très longtemps), donc personne pour me conseiller.  [...] Mon problème est que je n'arrive pas à obtenir de colonies bleues en milieu minimum sans Tryptophane et Leucine, ni même de colonies tout court, donc j'ai un peu de doutes sur ce protocole du moyen age qu'on m'a donné.   [...]

[Biochimie] A quoi ça sert?

Es ce quand on est a PH acide ou à PH basique que l'on élimine l'ADN JE sais que l'ADN est de charge négative donc je suppose que c'est quand on est a PH acide mais dans mon protocole, on m'indique qu'il faut tout d'abord mettre de la soude à 10 mol/L, es ce pour rompre les liaisons de la membrane de la levure.  [...] l'alcool sert pour la centri ( pas tres rapide 3.000 RPM) l'alcool permet de faire 'culoter une grande partie des protéines ( je n'en suis plus tres sur je suis entrain de me battre ac la glycélie pour le moment.s) mais le principe y est.  [...]

[Microbiologie] Centrifugation bactéries

Premiere chose importante. parler d'un protocole de centri en rpm (ou tour par minutes) n'a pas de sens puisque le rapport entre RPM et g (ou rcf) dépend du rotor. Pour qu'un protocole soit reproductible entre différentes centrifugeuses il faut s'intéresser a l'équivalent en g.  [...] Je ne comprends pas pourquoi tu veux concentrer. Apres 15 min a 1500 rpm (meme si je ne sais pas ce que ca fait en g) tu devrais voir un culot. Récupérer ce qu'il reste dans le surnageant ne devrait pas changer grand chose.  [...]

pb dépots echantillons d'ARN

Après avoir réaliser une extraction d'ARN de bacteries issue de l'eau avec un kit QIAGEN, je dépose mes échantillons avec du bleu de dépot pour ARN et là se produit une chose pas courante. Au lieu de que mon échantillon se retrouve au fond de mon puit (gel 2,5% agarose et tampon TE 1X tout a fait normal), celui ci se voit revenir à la surface et se dissipe dd'un coup dans mon gel.   [...] Dans le protocole du Sambrook and Russell, c'est Remove remaining ethanol with a disposable pipette tip. Store the open tube on the bench for a few minutes to allow the ethanol to evaporate. Do not allow the pellet to dry completely.   [...]

Le cas des jumeaux : une anomalie de nombre | Dossier

soit monozygotes (un seul ovule est fécondé par un seul spermatozoïde et l' embryon se divise ensuite. les deux foetus sont de même sexe et ont le même patrimoine génétique ).   [...] Au deuxième et troisième trimestres, ce sont les menaces d' accouchement prématuré (MAP), la rupture prématurée des membranes (RPM), la prématurité, l' hypertension artérielle (HTA), la pré-éclampsie ( hypertension artérielle associée à albuminurie et une rétention d'eau), le diabète gestationnel, l'intolérance cardiopulmonaire, le retard de croissance in utero (RCIU), l' hydramnios (excès de liquide amniotique ), le syndrome du jumeau transfuseur-transfusé (quand la grossesse est monochoriale et biamniotique), la mort in utero.  [...]

[Biotechnologie] Extraction et purification ADN végétal

Nous mélangeons par inversion de phase et nous plaçons notre microtube dans la centrifugeuse à 2000 rpm pendant 10 minutes.  [...] Si tu as fait une electrophorese il est possible que le bain marie t'es servi à bien décompacter tes protéines (ou ADN), afin de faciliter leur migration.  [...]

g et rpm incubateur

Cependant, dans le cas des incubateurs de cellules avec agitation, je le faisais à 200 rpm (ex. toute une nuit) mais je n'ai aucune idée de la marque de l'agitateur ou du rotor (impossible que je retourne au labo c'est trop loin... et sur internet je trouve que en rpm).  [...] Contrairement aux centrifugations, on ne parle pas en g pour les incubateurs, puisque le but n'est pas de culotter les cellules mais de les garder en suspension. C'est a peu près similaire entre toutes les machines.   [...]

[Microbiologie] Quelle souche d'E.coli pour préparer des cellules compétentes?

On utilise aussi souvent les BL21 quand on veut faire des inductions d'expression proteiques par l'IPTG (certaines protéases sont inhibées dans ces bactéries). Elles poussent pas mal.  [...] Vous amenez 100ml de bactérie à DO 0.4-0.5, vous mettez cela dans deux falcon 50 et vous laissez sur glace 10 min. Un tour de centri à froid pour culoter à 4000 rpm (faudrait pas que vos cellules pètent) et vous ajouter dans chacun des tubes 25ml de CaCl 2 50 mM fraichement préparé.  [...]

[Biologie Cellulaire] Extraction des plaquettes sanguines

La 1ère méthode est la réalisation d'un PrP (plasma enrichit en plaquettes), par une simple étape de centri à 900 rpm (env. 200g) pendant 10 min. Il suffit ensuite de récupérer 70% du surnageant (pour éviter la contamination par les érythrocytes et les leukocytes).  [...] Il me semble que ce soit le principe d'un Ficoll... Très utile pour obtenir des prep sans contaminants rouges, mais il reste tout de même des leukocytes.   [...]