• Santé - Rôle, Tampon, Protéine, Congélation

Role de EDTA et NaClO4???

Bonjour, dans un TP de biochimie sur l'isolement et le dosage d'ADN de foie de porc, je dois savoir quel est le role d'un tampon de broyage contenant EDTA et aussi quel est celui du NaClO4 sur une protéine pendant une congelation.Donc si qqun est au courant, merci de me le faire savoir.  [...] de plus, L'EDTA en chelatant les ions Ca2+ va favoriser la disparition des complexes proteiques impliques dans les contacts cellule-cellule tels que jonctions serres et autres desmosomes. les proteins impliques dans ces complexes sont dependantes du Ca2+.  [...]

[Biochimie] Amylase et amidon

L'amylase est une protéine, une chaine d'acide aminés repliés les uns sur les autres dans une conformation très particulière. En chauffant la protéine on va l'amener à se déplier (pour une question d'entropie, d'énergie tout ça, c'est un peu long à décrire) et hors de sa configuration habituelle, elle n'est plus capable d'exercer sa fonction.  [...] La congélation ne détruit généralement pas les protéines, il s'agit justement d'une opération qui augmente leur stabilité en les forçant à se replier encore plus. (maintenant il faut savoir qu'un grand nombre de congélation-décongélation peuvent altérer la protéine pour d'autres raisons).  [...]

[Biotechnologie] production industrielle d'interferon alpha-1

Comme exemple citons la production de l'IFN alpha 2a (Roféron A marque déposée )par les produits Roche (procede utilisant le passage en cellules E.coli K12) les cellules sont d'abord lysées par congélation. puis on les façonne en pelotes contenant les corps d'inclusions recombinants, facilement stockables,ensuite on reprend les pelotes par un tampon et on mélange pour en extraire les protéines avant de séparer le surnageant des débris cellulaires par ultracentrifugation.  [...] la solution protéique est enfin purifiée par le passage séquentiel à travers différentes colonnes de chromatographie. Le contrôle final de qualité reste une étape complexe car il faut démontrer la bonne configuration du produit final dans l'espace.  [...]

[Microbiologie] antibiotique

je voudrais savoir lorsqu'on réalise un antibiogramme,pourquoi utilise ton la fluméquine comme antibiotique avec la Bacillus Subtilis, l'OTC avec le Bacillus Cereus et le sulfadiazine avec le Microccocus luteus.   [...] et je me pose ausi quelques questions sur la congélation bactérienne, j'utilise un milieu de congélation pour congeler mes souches de Bacillus cereus et subtilis qui contient de la peptone trypsique de caséine, de l'extrait de boeuf et de l'eau,je voudrais savoir le rôle de ces differents composants,et - il nécéssaire d'ajouter dans ce milieu du glycérol.  [...]

[Biologie Cellulaire] phosphorylation et congélation

je vous ai déjà envoyé qqs messages concernant la mise en évidence d'une phosphorylation sur une protéine d'intéret. J'ai pour vous une nouvelle petite question. pensez vous que la phosphorylation soit sensible à la congélation des échantillons. en d'autres termes, puis-je tester un traitement phosphatase après avoir immunoprécipité ma protéine à partir d un échantillon congelé à -80°C (et ayant donc subit un cycle de congélation/décongélation).  [...] Normalement pour l'étude que tu fais, un seul cycle de congélation/décongélation n'affectera pas ton expérience. Le paramètre qui est le plus affecté est la structure de la protéine, donc c'est surtout l'immunoprécipitation qui est concernée (dans le cas où l'anticorps reconnait un épitope conformationnel).  [...]

congélation-décongélation S.cerevisiae

Bonjour à tous, lors de la transformation de saccharomyces cerevisiae par méthode de congelation décongélation, il est indiqué dans mon cours qu'il faut décongelé en présence de polyéthylène glycol. Quel est son rôle,en fait.  [...]

Carte de restriction d'un plasmide inconnu

Sachant que l'on doit choisir 5 à 6 enzymes. Deja dans un premier temps comment peut on savoir lesquels choisir préférentiellement Est ce que le choix des enzymes auraient juste avoir avec les couples d'enzymes qui ont une bonne activité ensemble pour pouvoir les coupler lors des digestion avec un même tampon Je compte faire mes digestions et analyser sur gel d'électrophorèse d'agarose à 1% (ne connaissant pas du tout la taille du plasmide je suppose qu'il a plus de chance de se trouver entre 10kb et 0.  [...] Le deuxième problème est la concentration en glycerol. Généralement, les enzymes sont suspendu dans un tampon coupé à 50% de glycerol, afin d'éviter les cycles de congélation/décongélation, qui abimeraient l'enzyme. Cependant, le glycerol est très mauvais pour l'activité de l'enzyme, et communément, ont admet que la quantité d'enzyme (+glycérol) ne dois pas dépasser 10% du volume total de digestion.  [...]

[Biologie Moléculaire] Nettoyage d'ARNs & Transfert de protéines

de mon côté j'utilise un des protocoles fourni par Qiagen, pour lequel j'ai simplement adapté les volumes de tampon pour optimiser le rendement, et ajouté une étape pour récupérer les protéines après la première centrifugation.  [...] Concernant la précipitation tu as raison, c'est hyper dur à redissoudre. Je le fais dans du tampon 2D (saturé en urée, thiourée + CHAPS et SDS) et j'incube mes échantillons 1 nuit à 4°C (pas de congélation). Ca facilite la dissolution (le culot devient translucide, un peu gélatineux).  [...]

[Biologie Cellulaire] Congélation de cellules adhérentes

j'ais fait un TP où j'ais congelé des cellules (adhérentes mais ici ce n'est pas important je pense). Dans le milieu de congélation j'ais plusieur concentration de DMSO et une concentration fixe de FCS (50%) (sérum de veau foetal) afin de determiner le milieu de congélation adéquat après décongélation.  [...] Mon problème c'est que je ne comprends pas l'utilisation de FCS (je suis déjà dans un milieu complet contenant 10% de FCS.) apparament le FCS à un rôle particulier dans la congélation qui m'échappe.  [...]

[Biologie Cellulaire] Effets de la congélation

Pour cela, on modifie un peu le milieu de congélation. Avec des cryoprotecteurs comme le DMSO, on peut faire en sorte que le réseau d'eau cristalise différemment. Dans le cas du DMSO, l'eau devient solide mais dans un système cubique plutôt qu'hexagonal, ce qui est moins délétère pour la cellule.  [...] J'ai réaliser une experience avec des cryoprotecteurs pénétrants et non penetrants avec la même vitesse de congelation assez lente.  [...]