• Santé - Rôle, Solution, Western

[Biochimie] 4 chloro 1 naphtol

s'il vous plaît quel est le rôle de la solution 4 chloro 1 naphtol dans le western blot.  [...] Elle sert à révéler une activité peroxydase, il me semble.   [...]

Matériels et méthodes | Dossier

Cette membrane est incubée pendant 1,5 heure avec une solution pour western blot (cf. annexe 1) contenant du lait à la concentration de 10 %, ceci permettra d'éviter des liaisons non spécifiques des anticorps utilisés par la suite. La solution pour western blot est ensuite employée pour laver la membrane 4 fois 10 minutes.  [...] L'anticorps primaire polyclonal de chèvre (TEBU), correspondant à l'isoforme de la protéine kinase C recherchée, est dilué 1000 fois dans la solution pour western blot à laquelle il est ajouté du lait et de la sérum albumine bovine concentrée à 1%, puis il est mis en contact avec la membrane pendant une nuit à 4°C ou pendant 1,5 heure à température ambiante.  [...]

Matériels et méthodes | Dossier

Les cellules sont remises en suspension dans le tampon de lyse pour western blot (cf. annexe 2) à la concentration de 50.10 6 cellules /ml. Elles sont soniquées 6 fois 5 secondes, en prenant garde de bien refroidir les tubes entre chaque passage. Tous les échantillons sont dilués au tiers par une solution échantillon (cf.  [...] L'anticorps primaire polyclonal de lapin (TEBU), correspondant à l'isoforme de la cyclooxygénase recherchée, est dilué 1000 fois dans la solution pour western blot à laquelle il est ajouté du lait concentré à 1%, puis il est mis en contact avec la membrane pendant une nuit à 4°C ou pendant 1,5 heure à température ambiante.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot

Je voudrais savoir ce qu'il arriverait si on interverti le tampon de migration avec le tampon de transfert Donc ma question est. les tampons jouent-ils un role primordial dans le Western.  [...] NB. j'ecris avec un clavier qwerty aussi veuillez m'excuser pour l'absence d' accent.   [...]

bleu de coomassie et mousse/éponge

voila je vous expose mon problème en ce moment je réalise des western blot et dans la préparation une fois notre gel obtenu on le plonge dans une solution de bleu de coomassie pendant 20min puis on jette le surplus de bleu. Ensuite on plonge ce même gel dans une solution de décoloration pendant toute la nuit on rajoute à ça un carré de mousse ou d'éponge qui va absorber tout le bleu si on ne le met pas la décoloration de sera pas total.  [...] HELLP aidez une petite étudiante en bio qui rame (enfin notre prof est incapable de l'expliquer non plus ).   [...]

pH d'une solution protéique et Western-blot

après avoir réalisée une extraction protéique, j'ai repris mon culot (pas ou peu visible selon les échantillons) dans du Laemmli 1X+bétamercaptoéthanol. Après vortex, il s'est avéré que ma solution protéique est devenue jaune signifiant que mon échantillon était à un pH de 3 environ.  [...] Si je fais migrer cette solution acide dans mon gel de Western-blot, est ce que cela aura un impact sur la migration Le pH change la conformation des protéines mais est ce que cette dénaturation () aura un impact sur la migration/transfert et/ou révélation.  [...]

[Biologie Cellulaire] PBS ou TBS

Tout d'abord à quoi cela sert d'avoir des tampons salins. Pour éviter l'agrégations des protéines et des anticorps sous l'effet des forces électrostatiques. Les ions de petites tailles viennent former un écran autour des protéines chargées. En cas de bruit de fond on peut augmenter la force ionique de la solution en poussant la concentration de NaCl jusqu'a 0,5M.  [...] autre petite question. est que vous savez pourquoi le tampon de blocage contenait du Triton (solvant dont je connais le role ) pour l'ICC et pas pour le western.  [...]

[Biochimie] Denaturation des IgG avant western-blot

Et bien par ce que ma protéine fait des aggregats si je chauffe, d'ou ma question de température minimum, en espérant que les IgG soient dénaturés, mais que ma prot ne soit pas aggregée.   [...] Comment fait tu en pratique pour l'urée Tu pèses ce qu'il faut pour 1 échantillon (typiquement j'utilise 40-50 ul pour un western), ou bien tu fait une solution très concentrée (genre 20M) que tu ajoute a ton échantillon.  [...]

[Biochimie] Problème avec mon western

Ou alors essaye la technique proposée par Gorben, mettre tes deux anticorps primaires dans la même solution de TBS-T lait. Mais toutefois, je te conseille de faire attention les premières fois, il faut que tu t'assures que cela ne modifie pas, pour x raisons, le profil de ton western.  [...] la technique proposée par Gorben est bonne, sauf si tu fais ton western pour la premiere fois et que tu ne sais pas comment tes AC I réagissent. Car si jamais ils donnent des bandes aspécifiques et que manque de bol tu en as aux alentour du poid moléculaire d'une de tes protéines tu risques d'interpréter un artéfacte, il faut donc etre tres vigilant.  [...]

Protéine avec bcp de résidus acides migre de façon aberrante en western blot

Cette observation en western blot s'est faite à plusieurs reprises, que ça soit dans mon travail (pour des migrations à plus haut ou plus bas voltage), ou dans d'autres papiers. Je doute que ça soit un question de problème de migration, de dénaturation, ou encore SDS et de charge négative.  [...] Est-il possible que la conformation même de l'a a serine joue un role au niveau volume qu'il prends mais en même temps si une sérine arriverait à faire 100 KDa, on n'aurait beaucoup de problème dans les western blot.  [...]