• Santé - Rôle, Bactéries, Plasmide

opine

Le gène des opines est présent sur l'ADN T transféré par Agrobacterium dans la cellule végétale. Cet ADN possède un promoteur eucaryote qui lui permet d'être exprimé dans les cellules de la plante. Il code pour des auxines et des cytokinines qui entrainent une prolifération excessive des cellules formant des tumeurs.  [...] Il code également pour les opines qu'Agrobacterium est ensuite capable de cataboliser. Les opines jouent également un rôle dans la conjuguaison bacterienne permettant ainsi aux bactéries qui n'ont pas le plasmide Ti de l'acquérir.  [...]

[Microbiologie] bacterie resistantes

je dois cultiver des bactéries possédant un plasmide de résistance à un antibiotique. Dans le bouillon, je dois mettre cet antibiotique. Je ne comprends pas pourquoi puisque les bactéries sont résistantes Pouvez m'éclairer.  [...] - Au cours des divisions cellulaires, le plasmide peut ne pas être transmis à certaines bactéries filles, il y aura donc apparition de bactéries non résistantes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Le plasmide a t'il l'insert?

Donc vérifier que tes bactéries sans plasmide sont bien sensibles aux deux antibios, et d'abord faire pousser les bactéries transformées sur strept, puis repiquer les colonies en les identifiant sur ampicilline, puis tester par miniprep celles qui ne poussent pas sur ampicilline.  [...] Pourquoi ne pas faire une ou plusieurs mini prép d'ADN (en priquant une ou plusieurs colonies) et simplement faire une digestion suivie d'une migration sur gel d'agarose et voir si on insert est présent. Si oui repartir des bactéries qui ont intégré le bon plasmide avec insert et faire une maxi.  [...]

[Microbiologie] Culture bactérienne troublante

Avec le plasmide controle, la culture présentait un aspect habituel avec une solution LB trouble assez homogène. En revanche la culture avec le plasmide d'intérêt présentait de gros agglutinement de bactéries au fond de la bouteille en plus du LB trouble.  [...] ce peut il alors qu'en changeant de plasmide le résultat change et par conséquent si l'on effectue la transfection sur des bactéries des plasmides différents ayant tous les meme gene d'interret ( dans des expériences séparées sur la meme souche de bactérie) des résultats différents.  [...]

[Biologie Moléculaire] Selection de bactéries par Antibiotiques lors du clonage d'ADN

J'ai aussi compris que la sélection à la base de l'ampicillin va nous permettre de distinguer entre bactéries qui n'ont rien incorporé et bactéries qui ont incorporé un plasmide et la tetracycline va nous permettre de distinguer entre plasmide recombiné et non recombiné.  [...] *Bref, le contexte est le suivant. on veut cloner un gène de l'ADN humain, pour ceci on utilise les plasmides des bactéries d'E.Coli qui contiennent entre autres des gènes de résistance à la tetracycline et l'ampicilline, grâce aux enzymes de restriction on peut incorporer le gène humain qu'on veut cloner dans le plasmide à un emplacement entre les séquences du gène qui code pour la résistance à la tetracycline.  [...]

[Génétique] vecteur de plasmide

dans les vecteur de plasmide en peut cloner un ADN étrange par insertion dans un gène de résistance à un antibiotique la question est quelle est la méthode pour identifier les bactéries qui ont incorporés les plasmides recombinés ou le plasmides intacte.  [...] Pour identifier les bactéries qui ont incorporées les plasmides recombinant ou les plasmides non-recombinants, il faut étaler, sur une boite de.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification et purification de plasmide

Les culots de bactéries je les trouve pas énormes mais j'ai peur de saturer les colonnes de purif avec trop de bactéries si je dilue moins la préculture, ou trop de plasmides en utilisant du chloramphénicol. Je vais refaire la manip cette semaine en eluant avec un plus grand volume d'eau et en précipitant à la fin pour reconcentrer mon plasmide et je verrai bien si j'en ai plus cette fois.  [...] De deux choses l'une. soit ta combinaison plasmide/bactérie donne un faible rendement, soit ta technique de purif ne marche pas. Je te conseille de garder un aliquot (1.5ml) de tes bactéries avant de les lyser pour ta prep sur colonne. Fais une miniprep classique sur cet aliquot (lyse alcaline + isopropanol) et estime ton rendement en plasmide.  [...]

TP biochimie: introduction aux méthodes utilisées en génie génétique

Si tu veux introduire un plasmide en entier ou un voire des gènes dans une bactérie il y aurait la conjugaison où l'on a une bactérie donnatrice qui va donner le plasmide à une bactérie réceptrice par conjugaison. Pour que la donnatrice puisse donner son plasmide il faut que celui-ci possède les gènes tra indispensable pour la conjugaison car ils codent pour la formation des pili permettant le contact entre les 2 bactéries mais aussi le transfert de l'adn de la donnatrice vers la réceptrice.  [...] Après je ne sais pas si c'est possible mais tu pourrais peut-être fragmenter ton plasmide, l'injecter dans l'environnement. ensuite tu rend tes bactérie transformante c'est un état où les bactéries sont capable d'incorporer de l'ADN provenant de l'environnement.  [...]

Plasmide et gène LacZ

La première étape de l'utilisation des plasmides est la détermination des bactéries transformant (qui ont intégré un plasmide non recombinant) et des bactéries transformant recombinant (qui ont intégré des plasmides recombinant, i.e. contenant le gène luc), par rapport aux bactéries non transformant.  [...] Une fois les bactéries sélectionnées, il va falloir purifier les vecteurs, afin que l'ADN soit exempt de toute protéine, de tout ARN ou d'une quelconque contamination chimique. Puis, avant de commencer les expériences proprement dites, on transfecte les plasmides dans les cellules qui nous intéressent.  [...]

[Biologie Moléculaire] Probleme de ligase?

1/ Calcule to efficacité de transformation, si elle est en dessous de 10^6 colonies /ug de pUC18 (ou un plasmide de petite taille équivalent), jette tes bactéries et reprépares-en d'autres (ou achètes-en d'autres). Je vois trop d'étudiants me dire j'ai transformé 1ug de plasmide et j'ai un tapis, donc mes bactos sont OK.  [...] Des bactéries à 10^4 colonies/ug donneraient aussi un tapis avec 1ug de plasmide, pourtant elles seraient impropre à la plupart des constructions.  [...]